血小板内プラスミノゲンアクチベータインヒビタの産生部位と活性化機序の解明

阐明血小板内纤溶酶原激活剂抑制剂的产生位点和激活机制

• 批准号: 04671532
• 负责人: 坂田 洋一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04671532/
• 关键词: プラスミノゲンアクチベータインヒビター1; ウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベータ; ビトロネクチン; 血小板と線溶

人血漿中、及び血小板中にplasminogen activator inhibitor-1(PAI-1)が存在する。血漿中ではPAI-1はビトロネクチン(VN)と結合し、殆どが活性型で存在するのに、血小板中のPAI-1は、殆どが変性剤などで処理をしてはじめて活性を発現する潜在型で存在する。果たしてこの潜在型PAI-1は外部より取り込まれたものであろうか、骨髄巨核球で潜在型として産生されるのか、或は血小板内で活性型が潜在型に移行していくのかを解明することが今回の課題であった。まず、PAI-1を培養血管壁内皮細胞、血小板抽出物より精製し、これを放射性ヨードで標識し、潜在型、活性化型それぞれについて、正常人血小板、グレー血小板患者血小板、先天性PAI-1欠乏患者の血小板を用いて、血小板内取込みを観察した。PAI-1の血小板への取込みは観察されたが、血小板膜にはウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベータ(u-PA)が結合し、またVNも存在する為に、結果の解釈が極めて複雑なものになり、結合部位の同定などについて確定的なことは言えなかった。そこで、まずこれらの因子とPAI-1の結合部位の解析を施行した。解析には、種々の報告をもとに合成したペプタイド、PAI-1とVNの結合を阻害するモノクロナル抗体などを利用した。結果、PAI-1はu-PAとは、u-PAのkringle中のAsn107-Arg108-Arg109-Arg110-Pro111の部位、及びC端側活性機近傍のlle373---Trp398の部位と、またVNとはVNのSer111----GLu121の部位で結合することが明かとなりこれを報告した。当該部位のペプタイドを合成し、解析に用いることでPAI-1の血小板内取込みの機序などを明かにしていく予定である。尚、研究経過中にPAI-1欠乏患者が妊娠したが早期に流産したため、妊娠の維持と破水に如何にPAI-1が関わっているかを、卵膜を用いて組織化学的に解析し、これを報告した。

There is plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) in human blood and platelets. In the blood, the combination of PAI-1 and VN, the presence of PAI-1 in platelets, and the presence of latent phenotype in blood. The results show that the latent type of PAI-1, the potential type of megakaryocytosis, the potential type of thrombocytopenia, or the type of platelet active, the potential type of migration, the cause of the problem, and the cause of the problem. Blood vessel wall endothelial cells, platelet extractives, radioactivity, latent and active platelets, normal platelets, platelets from patients with congenital PAI-1 deficiency, platelets from patients with congenital PAI-1 deficiency, platelets from normal individuals, platelets from patients with congenital platelet deficiency, platelets from normal individuals, platelets from patients with congenital platelet deficiency, platelets from patients with congenital platelet deficiency, platelets from normal individuals, patients with congenital platelet deficiency, patients with congenital platelet deficiency. PAI-1 platelet scaffold was used to detect the presence of platelet antigen, platelet membrane antigen, platelet membrane, platelet membrane, platelet, platelet The analysis of the combination of the factor and the PAI-1 was carried out. Analyze and analyze several kinds of reports, synthesize PAI-1 and VN antibodies, and combine them with anti-tumor drugs to block the production of antibodies. Results: the results showed that the parts of PAI-1 u-PA, Asn107-Arg108-Arg109-Arg110-Pro111 in u-PA kringle, and the activity of C-terminal enzyme near lle373---Trp398, VN, VN and Ser111----GLu121 were combined with each other. When this part of the body is used to synthesize and analyze the target PAI-1, the machine sequence of platelet extraction is used to show that the target is predetermined. In addition, the purpose of this study was to study how the patients with deficiency of PAI-1 in the early stage of pregnancy, how to maintain PAI-1 in the early stage of pregnancy, how to analyze the egg membrane by histochemistry, and how to maintain the dehydration of pregnancy in the early stage of pregnancy.

项目成果

Jun Mimuro: "Identification of the plasminogen activator inhibitor-1 binding hepta-peptide in vitronectin." Biochemistry,.

Jun Mimuro：“玻连蛋白中纤溶酶原激活剂抑制剂 1 结合七肽的鉴定。”

Munekiyo Kaneko: "Interaction between finger and kringle-2 domains of tissue-type plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1." J.Biochem.111. 244-248 (1992)

Munekiyo Kaneko：“组织型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原激活剂抑制剂 1 的 Finger 和 kringle-2 结构域之间的相互作用。”

Takashi Watanabe: "Fibrinolytic components in fetal membrane and in amniotic fluid." Am.J.Obstet.Gynecol.,.

Takashi Watanabe：“胎膜和羊水中的纤溶成分。”

Jun Mimuro: "Reversible interaction between plasminogen activators and plasminogen activator inhibitor-1." Biochim.Biophys.Acta. 1160. 325-334 (1992)

Jun Mimuro：“纤溶酶原激活剂和纤溶酶原激活剂抑制剂-1 之间的可逆相互作用。”