スタフィロキナーゼの血栓溶解活性発現機作の分子生物学的解析

葡萄激酶溶栓活性机制的分子生物学分析

• 批准号: 06671107
• 负责人: 坂田 洋一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671107/
• 关键词: スタフイロキナーゼ; プラスミノゲン; プラスミン; 基質特異性

心筋梗塞や、脳血栓の治療薬として、種々の血栓溶解剤が模索されている。黄色ブドウ球菌の産生するスタフイロキナーゼ(SAK)はその一つである。SAKそれ自身はプラスミノゲン(PG)活性化(PA)活性を持たない。また、PGが活性化されたプラスミン(PG)もPA活性を持たない。しかし、両者が結合するとPA活性を持つようになる。しかもこのPAは血栓特異性を有する。この活性化機構の分子機作の解析が本研究の目的であった。当該年度にかなり解析は進行し、その一部を投稿した(BBA in press),更に現在Major Journalに数編を投稿準備中である。以下順にその概略を述べる。1.PMとSAK-PM複合体の基質特異性の違いを以下の方法で解析した。(a)PMに特異的な合成基質(HD-Val-Leu-Lys-pNA)を用いて化学反応論的に両者が極端に異なることを証明した(この基質に対するKmがPMに対し、SAK-PMは約10倍大きくなる)。(b)Glu-PGのN末端ペプチドの限定分解は、PMにより速やかに進行するがSAK-PMによっては認められないことを、分解産物のN末端アミノ酸の同定と、SDS電気泳動にて証明した。2.PGとSAK,PMとSAKの結合反応の分子機作を解析した。方法は、イプシロンアミノカプロン酸、アプロチニン、DEP,PAPMSF,などを利用し、PGのエラスターゼや、V8による分解産物、mutant recombinant SAK,放射性ヨードで標識したそれぞれの蛋白質を用いて施行した。結果、これまでの報告とは異なり、この反応が2段階反応であることや、両者の結合に関与する部位がかなりのレベルまで明らかになった。現在、更に他の方法で結果を確認するとともに解析を進め、幾つかのJouranalにまとめて報告する予定である。

The treatment of myocardial infarction and thrombosis is very effective. The yellow fungus is produced in a variety of ways. SAK is self-activating (PG) and active (PA). The activity of PG is very high. The PA activity of the two groups is very high. The PA is thrombosis-specific. Analysis of molecular mechanism of activation mechanism is the aim of this study. When the analysis is in progress for the year, a submission is made (BBA in press), and a number of submissions are being prepared for Major Journal. The following is a summary of the following. 1. The matrix specificity of PM and SAK-PM complex was analyzed by the following methods. (a)PM The specific synthetic matrix (HD-Val-Leu-Lys-pNA) was proved to be extremely different from the chemical reaction matrix (Km = PM = SAK-PM = about 10 times larger). (b) The N-terminal decomposition of Glu-PG was characterized by the isostatic and SDS electrokinetic behavior of the N-terminal acid. 2. Analysis of molecular mechanism of PG,PM and SAK. Methods: To identify and use the protein in the process of protein synthesis, such as acid, DEP,PAPMSF, PG, V8, mutant recombinant SAK, and radioactivity. The results show that there are two levels of antithesis in the report and the combination of antithesis and antithesis. Now, we can confirm the results of other methods, analyze them, and report them to you.

项目成果

Koichi Arai: "Effect of staphylokinase concentration on plasminogen activation" Biochimica et Biophysica Acta. (in press).

Koichi Arai：“葡萄球菌激酶浓度对纤溶酶原激活的影响”Biochimica et Biophysicala Acta。

坂田洋一: "血栓症" 中外医学社, 128 (1994)

坂田洋一：“血栓”中外医学社，128（1994）

Kazuya Mori: "Effect of glycosidase inhibitors on the biosynthesis of α2-plasmin inhibitor and antithrombin III in Hep G2 cells" Biochimica et Biophysica Acta. 1226. 300-306 (1994)

Kazuya Mori：“糖苷酶抑制剂对 Hep G2 细胞中 α2-纤溶酶抑制剂和抗凝血酶 III 生物合成的影响”Biochimica et Biophysica Acta。 1226. 300-306 (1994)