線溶因子の細胞内代謝、及び生物活性に果たす糖鎖の役割の分子生物学的解析

糖链在纤溶因子细胞内代谢中的作用及生物活性的分子生物学分析

• 批准号: 05274223
• 负责人: 坂田 洋一
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05274223/
• 关键词: alpha2-プラスミンインヒビタ; N-methyl-deoxynojirimycin; 糖鎖構造; O結合型糖鎖

N-methyl-1-deoxynojirimycinが肝細胞における線溶系のインヒビタalpha2-plasmin inhibitor(alpha2-Pl)の産生放出を阻害するが、homologyの高い凝固系のインヒビタantithrombin IIIの産生放出を阻害しないことを報告した。(BBA in press)その機序解明のため、未報告のalpha2-P1糖鎖構造を解析することを試みた。まず、精製alpha2-Plをヒドラジン分解により糖鎖を遊離し、非還元末端を^3HNaBH_3により標識し、シアリダーゼ処理後、BiogelP-4カラムにより分画した。グリコースオリゴマーの溶出位置より算定したglucose unit (GU)に対する相対値として示すと、alpha2-Plは16.5,13.5,3.5GUの位置に溶出された。13.5GUに溶出された糖鎖をエンドグリコシダーゼによる遂次分解、P-4カラムによる分画などで解析したところ、典型的2本鎖複合型構造であった。16.5GU分画がRAMM法により分析すると、GlcNAcにFucがalpha1-3結合し、非還元末端側のGalbeta-4GlcNAc構造(ルイスX構造)を含んだ3本鎖複合型構造を持つことが明らかとなった。3.5GUにピークが存在したことから、シアル酸除去alpha2-Plを電気泳動後、PNAレクチンとの反応性を調べた。認識することが明らかとなり、alpha2-PlはO結合型糖鎖を持つことが判明した。シアル酸の結合様式は、1-3個結合したN結合型と1個結合したO結合型糖鎖の存在していることがHPLC分析により明らかとなった。alpha2-3結合したシアル酸のみを切断するニューキャッスル病ウイルスのシアリダーゼを用いて解析したところ、O結合型糖鎖と3個シアル酸のついたN結合型糖鎖のシアル酸のみが切断された。三本鎖糖鎖がルイスX構造を持つことより、alpha2-Plはその構造上にシアリルイスX構造を持つ糖鎖を有することが示唆された。このことはセレクチンとalpha2-Plが結合する可能性を示唆している。

N-methyl-1-deoxynojirimycin inhibits the production and release of alpha2-plasmin inhibitor(alpha2-Pl) in hepatocytes and inhibits the production and release of antithrombin III in high coagulation systems of histology. (BBA In press), the mechanism of the alpha2-P1 sugar lock structure was analyzed. After processing, BiogelP-4 is separated from the sugar chain by alpha2-Pl decomposition and non-reduction. The dissolution position of the glucose unit (GU) was calculated according to the relative values of alpha2-Pl and 16.5, 13.5 and 3.5 GU. 13.5 GU dissolution of sugar lock, secondary decomposition, P-4 separation, typical 2-lock complex structure. 16.5GU analysis of RAMM method, GlcNAc, Fuc, alpha1-3 combination, Galbeta-4 GlcNAc structure on the non-reducing end side (X structure), including 3 intrinsic lock complex structure. 3.5 GU Alpha2-P1-O-linked sugar chain 1-3 binding forms of the sugar chain and 1-3 binding forms of the sugar chain alpha2-3-linked amino acids and amino acids are cut off from each other. The amino acids and amino acids are cut off from each other. The three-dimensional lock has a structure of alpha 2-P1 and a structure of alpha2-P1. The possibility of combining alpha2-Pl with alpha2-Pl is indicated.

项目成果

Kazuya MORI: "Effect of glycosidase inhibitors on the biosynthesis of alpha2-plasmin inhibitor and antithrombin III in Hep G2 cells." Biochim.Biophys.Acta. (in press).

Kazuya MORI：“糖苷酶抑制剂对 Hep G2 细胞中 α2-纤溶酶抑制剂和抗凝血酶 III 生物合成的影响。”

Jun MIMURO: "ldentification of the plasminogen activator inhibitor-1 binding heptapeptide in vitronectin." Biochemistry. 32(9). 2314-2320 (1993)

Jun MIMURO：“在玻连蛋白中鉴定纤溶酶原激活剂抑制剂-1 结合七肽。”

Jun MIMURO: "An abnormal protein C(protein C Yonago)with amino acid substition of Gly for Arg-15 caused by a single base mutation of C to Gin codon 57(CGG-GGG)." lnt.J.Hematol.57. 9-14 (1993)

Jun MIMURO：“一种异常的蛋白 C（蛋白 C 米子），其氨基酸由 Gly 取代 Arg-15，由 C 到 Gin 密码子 57 (CGG-GGG) 的单碱基突变引起。”

Takashi WATANABE: "The role of fibrinolytic system in the maintenance and rupture of the fetal membrane." Am.J.Obst.& Gynecol.168(4). 1283-1289 (1993)

Takashi WATANABE：“纤溶系统在胎膜维持和破裂中的作用。”