プラスミノゲンアクチベ-タインヒビタの放出機序の分子、遺伝子レベルの解析

分子和基因水平分析纤溶酶原激活剂抑制剂的释放机制

• 批准号: 03671198
• 负责人: 坂田 洋一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03671198/
• 关键词: プラスミノゲンアクチベ-タインヒビタ-1; 骨髄巨核球; 血小板α顆粒; 血管壁内皮細胞; CMK細胞

活性型プラスミノゲンアクチンベ-タインヒビタ-1(PAIー1)は37度Cでインキュべ-ションすると半減期約2時間で潜在型に移行する。潜行型PAIー1は変性剤処理をして初めて活性を発現する。血小坂のα顆粒内に存在するPAIー1はほとんどが潜在型で存在する。血管壁内皮細胞の培養上清に集積してくるPAIー1もそのほとんどが潜在型である。後者の理由は次のように説明されている:1、培養中に牛血清中に含まれるビトロネクチンが培養容器に付着し、これに内皮細胞で産生され数分以内に放出された活性型PAIー1が特異的に結合する。2、潜在型PAIー1になると、ビトロネクチンと殆ど結合しないために上清に集積する。今回実験に用いた骨髄巨核芽球由来細胞であるCMKでは、浮遊細胞の形で培養可能であり、細胞を洗浄し、別の容器へ移すことにより、牛血清の実験への人工的関与をほとんど無視することが可能である。それにもかかわらず、CMK細胞においても細胞内外に集積するPAIー1はその抗原量の約10%のみが活性型あり、殆どが潜在型であった。そこでCMK細胞を分画し、PAIー1の細胞内局在を調べたところ,ほとんどが細胞質に存在していた。糖染色、コンカナバリンAセファロ-ズなどに対する結合から判断するかぎり、PAIー1に糖は付加されていた。このPAIー1の細胞外への放出をPAIー1を ^<35>Sーmethionineでmetabolical labelingし、Pules Chase Studyにて観察した。結果、細胞質中のPAIー1が培養液相に放出されるのには3時間以上かかることが明らかとなり、培養液中に活性型PAIー1が少ないのはそのためであることが解かった。以上のことより血小板内PAIー1は骨髄巨核球でつくられるが、細胞内に蓄えらている間に潜在型に移行していくために、その殆どが潜在型で存在する可能性が示唆された。

Active type プラスミノゲンアクチンベ-タインヒビタ-1(PAIー1)は3 7 degrees C でインキュべ-ションすると has a half-reduction period of about 2 hours and is a latent type of migration する. Stealth-type PAIー1 has a neutral and active nature. There is no latent type of PAI in blood Kosaka's α particles. The culture supernatant of endothelial cells in the blood vessel wall is collected and collected. PAI is a latent type. The reasons for the latter are as follows: 1. The culture volume of bovine serum contained in the culture medium is as follows: The device is attached to the endothelial cells, which produce and release the active PAI-1 specific binding enzyme within a few minutes. 2. The latent type PAIー1になると, ビトロネクチンと殆ど combined with しないために上清にassembleする. This time, we will use the CMK-derived cells from the bone marrow, the planktonic cells can be cultured in the form, and the cells can be washed. The net container, the other container, the bovine serum, the artificial one, the artificial seal and the をほとんどignore, the possibility である. PAI, CMK cell PAI The amount of ー1はそのantigen is about 10% of the active type of のみが and the latent type of であった. The CMK cells are separated and the PAI1 cells are localized in the cells, and the cytoplasm of the cells is present. Sugar dyeing, コンカナバリンAセファロ-ズなどに対するcombinationからJudgmentするかぎり, PAIー1にsugarはFUKAされていた.このPAIー1の extracellular へのreleaseをPAIー1を ^<35>Sーmethionineでmetabolical labelingし、Pules Chase Studyにて観看した. As a result, the PAI in the cytoplasm of the culture liquid phase was released and the PAI was released for more than 3 hours.らかとなり, the active type of PAIー1 in the culture medium is less ないのはそのためであることがsoluble かった. The above PAI in platelets is PAI in bone marrow, meganuclear spheres, and in cells.る间にlatent type にshifting していくために, そのどがlatent type でexisting するpossibility がshow instigation された.

项目成果

Munekiyo Kaneko: "The plasminogen activator inhibitorー1 binding site in the kringleー2 domain of tissueーtype plasminogen activator." Biochem.Biophys.Res.Commun.178. 1160-1166 (1991)

Munekiyo Kaneko：“组织型纤溶酶原激活剂 kringle-2 结构域中的纤溶酶原激活剂抑制剂 1 结合位点。Biochem.Biophys.Res.Commun.178（1991）。”

Sho Watanabe: "The role of the fibrinolytic system in the maintenance and rupture of the fetal membrane."

Sho Watanabe：“纤溶系统在胎膜维持和破裂中的作用。”

Yoichi Sakata: "The specific activity of plasminogen activator inhibitorー1 in disseminated intravascular coagulation with acute promyelocytic lerkemia." Blood. 77. 1949-1957 (1991)

Yoichi Sakata：“纤溶酶原激活剂抑制剂 1 在急性早幼粒细胞白血病弥漫性血管内凝血中的特异性活性。” 77. 1949-1957 (1991)

Yoichi Sakata: "Production and secretion of plasminogen activator inhigitorー1 from the megakaryoblastic cell line,CMK" submitted to J.Cell Biol.

Yoichi Sakata：“巨核细胞系 CMK 中纤溶酶原激活剂抑制剂-1 的产生和分泌”提交给 J.Cell Biol。

Munekiyo Kaneko: "Interactions between the finger and kringleー2 domains of tissueーtype plasmingen activator and plasminogen activator inhibitorー1." J.Biochem.111. 244-248 (1992)

Munekiyo Kaneko：“组织型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原激活剂抑制剂 1 的指和 kringle-2 结构域之间的相互作用。J.Biochem.111（1992）。”