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再構成系による大腸菌蛋白質膜透過系の分子機構の解析

利用重构系统分析大肠杆菌蛋白膜渗透系统的分子机制

基本信息

批准号：
04680183
负责人：
徳田元
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌の蛋白質膜透過系は、精製したSecA、SecEおよびSecYから再構成できることを明らかにしている。この再構成系を用い、膜透過系の構造と機能について以下の点を明らかにした。1.必須因子である膜内在性SecEは、分子量約14,000の比較的小さい蛋白質であり、3箇所の膜貫通領域を持つと考えられている。遺伝子工学的手法によって、3番目の膜貫通領域のみからなる欠失SecEを作製し、これを大量発現させた大腸菌から精製した。再構成系によって、欠失SecEが正常SecEに匹敵する活性を有していることを明らかにした。また、欠失SecEはSecYと相互作用することも示した。SecEの機能は、C-末端領域の膜貫通部分に集中して存在することが明らかとなった。欠失SecEは、分子量が約6,000の低分子でありながらなお必須因子として機能する。この蛋白質の構造と機能の詳細を更に検討している。2.再構成活性は反転膜小胞の活性に比べ低いが、大腸菌の細胞質膜には、再構成活性を著しく促進する因子が存在することを見いだした。この因子を膜から可溶化し、均一に精製した。精製因子をSecEやSecYと共にプロテオリポゾームに再構成すると、膜透過活性が20倍以上促進された。部分アミノ酸配列を決定した結果、新因子であることが判明しSecGと命名した。またこの因子の構造遺伝子の一部と思われるDNA配列が、データベース検索の結果明らかとなった。現在この遺伝子のクローニングを行っている。SecG変異株の作製、SecG大量発現系の構築、SecGの精製ならびにその役割の生化学的解明等、今後一層新たな展開が期待できる。

E. coli protein membrane permeation system, refined SecA, SecE, SecY, reconstitute The structure and function of the membrane transmission system are discussed below. 1. The essential factor is membrane internality SecE, a relatively small protein with a molecular weight of about 14,000, and three membrane penetration domains. The method of gene engineering is to produce a large number of Escherichia coli through the membrane. The second part of the system is composed of two parts: one part is composed of two parts, the other part is composed of two parts. The interaction between the two sides of the coin It is clear that the function of SecE exists centrally in the membrane penetration portion of the C-terminal area. The molecular weight is about 6,000 and the molecular weight is about 6,000. The structure and function of these proteins are discussed in detail. 2. The activity of the recombinant membrane is lower than that of the cell membrane. The activity of the recombinant membrane is lower than that of the cell membrane. The film is soluble and uniform. The purification factor is more than 20 times higher than that of the total composition. A new factor is determined. A part of the gene structure of the gene is thought to be DNA alignment, DNA sequence and DNA sequence. Now, we're going to have to go through this. The production of SecG mutant, the construction of SecG mass production system, the purification of SecG, the biochemical interpretation of SecG, etc., the development of a new layer in the future