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再構成系とin vitro実験系による大腸菌蛋白質膜透過の分子機構の解析

利用重构系统和体外实验系统分析大肠杆菌蛋白膜渗透的分子机制

基本信息

批准号：
02680153
负责人：
徳田元
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680153/
关键词：
蛋白質の膜透過再構成実験系プロトン駆動力大腸菌海洋細菌

项目摘要

反転膜小胞を用いたin vitro蛋白質膜透過系において、以下の成果が得られた。1.分子内にジスルフィド結合を持った前駆体蛋白質は、大腸菌の膜を透過するためにプロトン駆動力が必須となることを見いだした。2.大腸菌の蛋白質膜透過反応において、プロトン駆動力はATPに対する親和性を高める作用を持っていることを見いだした。3.大腸菌蛋白質膜透過反応において、ATPとプロトン駆動力の役割に関してこれまでに得られた知見を総合し、モデルを提出した。4.海洋性好塩細菌Vibrio alginolyticusの反転膜小胞において、蛋白質膜透過のin vitro実験系を構築し、大腸菌のSecA蛋白質が顕著に反応を促進することを見いだした。またこの系において、プロトン駆動力ではなく、Na^+駆動力が重要であることを見いだした。大腸菌の蛋白質膜透過系の再構成実験系において、以下の成果が得られた。1.細胞質膜をオクチルグルコシドで可溶化後、希釈によってオクチルグルコシドを除きリポゾ-ムに組み込み、蛋白質の膜透過系を再構成する方法を確立した。2.SecE蛋白質を精製し、これが膜透過の必須の因子であることを明らかにした。3.Secy蛋白質を精製し、蛋白質膜透過装置の必須因子であることを証明した。また、膜透過装置の基本単位は、SecE、Secy、SecAの3者のみで構築できることを明らかにした。

The membrane cell is used in vitro protein membrane permeation system, and the following results are obtained. 1. Intramolecular binding of precursor proteins to E. coli membrane 2. E. coli protein membrane permeability through reverse osmosis, reverse osmosis, ATP affinity, high affinity, 3. E. coli protein membrane permeation reaction, ATP and protein dynamics related to the production of protein, protein and protein 4. Construction of a vitro system for the transmission of protein membranes from the marine bacterium Vibrio alginolyticus, and promotion of the secretion of protein from Escherichia coli The power of the system is important. The reconstruction of E. coli protein membrane permeation system was studied. 1. A method for reconstituting the membrane permeability system of protein was established after solubilization of the plasma membrane. 2. SecE protein is refined, and the necessary factors for membrane transmission are determined. 3. Secy protein purification, protein membrane transmission device must be proved The basic unit of membrane transmission device is composed of three parts: SecE, Secy and SecA.