細菌リポ蛋白質の膜遊離を触媒する新規ABCトランスポーターの構造

催化细菌脂蛋白膜释放的新型ABC转运蛋白的结构

• 批准号: 13117201
• 负责人: 徳田 元
• 金额: $ 8.32万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13117201/
• 关键词: リポ蛋白質; ABCトランスポーター; 大腸菌; 膜局在化; 脂質修飾; 分子シャペロン; ATP; 膜遊離

リポ蛋白質+2位のアミノ酸残基がアスパラギン酸の場合のみリポ蛋白質は内膜に残留する。内膜残留シグナルはなぜその役割を発揮するかを、LolCDEとリポ蛋白質を再構成したプロテオリポゾームで調べた。その結果、内膜残留シグナルを持つリポ蛋白質は、LolCDEの基質にならないこと、すなわちLol回避シグナルであることを明らかにした。一方、選別シグナルが遊離反応の時に機能するのか、リポ蛋白質の脂質修飾に影響を与えるのかについては、確定していなかった。そこで、アポ型リポ蛋白質を調製し、in vitroで成熟体リポ蛋白質に変換する実験系を構築し解析し、選別シグナルによって脂質修飾は異ならないこと、選別シグナルは遊離反応のみに影響を持つことを確立した。強く内膜に残留するシグナルを持ったリポ蛋白質を、外膜にまで運んでしまう変異株を分離したところ、LolCDE複合体の膜サブユニットLolCの40番目のアラニンがプロリンに変化した変異体であった。さらにこの変異体の分離によって、これまで不可能であったLolAとLolBが選別シグナルを認識するかどうかを調べた。その結果、選別シグナルは、LolCDEのみが認識することが初めて明らかになった。膜サブユニットLolCとLolEのアミノ酸配列はかなり相同性があるが、遺伝子破壊株を構築することにより、どちらのサブユニットもリポ蛋白質の遊離反応に必須であることを明らかにした。また、50種以上の大腸菌のABCトランスポーターの中で、LolCDEはMsbAと同様必須であることが判明した。遊離反応の際、LolCDEとLolA間には相互作用があることがLolA変異体の分離により初めて明らかになった。さらに、LolAからLolBにリポ蛋白質を受け渡すことができない変異体も分離した。

In the case where the amino acid residue at the +2 position of the protein is absent, the amino acid residue in the inner membrane is absent. The inner membrane of the cell is still intact, and the cell is still intact. As a result, the membrane residue was removed from the protein matrix, and the Lol matrix was removed from the protein matrix. On the one hand, the function of the selective ligand when free peptides are present and the influence of lipid modification on the complex protein are both uncertain and definite. The structure of lipid modification system for protein modulation, in vitro, mature protein modulation, in vitro, in vitro Strong inner membrane residual protein, outer membrane residual protein, outer membrane residual protein This is the first time I've ever seen a woman who's been in love with a woman. The results of the selection process are as follows: The structure of the protein is different from that of the protein. More than 50 kinds of E. coli must be identified. The interaction between LolCDE and LolA is the beginning of the separation of LolA. LolA, LolB, LolB, LolA, LolB, LolA, LolB, LolB, LolA, LolB, LolA, LolB, LolB, LolA, LolB, LolA, LolB, Lol

项目成果

Terada, M.: "Lipoprotein sorting signals evaluated as the LolA-dependent release of lipoproteins from the cytoplasmic membrane of Escherichia coli"J.Biol.Chem.. 276. 47690-47694 (2001)

Terada, M.：“脂蛋白分选信号被评估为大肠杆菌细胞质膜中脂蛋白的 LolA 依赖性释放”J.Biol.Chem.. 276. 47690-47694 (2001)

Narita, S.: "Disruption of lolCDE, encoding an ATP-binding cassette transporter is lethal for Escherichia coli and prevents the release of lipoproteins from the inner membrane"J. Bacteriol.. 184. 1417-1422 (2002)

Narita, S.：“编码 ATP 结合盒转运蛋白的 lolCDE 的破坏对大肠杆菌是致命的，并阻止脂蛋白从内膜释放”J.

Miyarnoto, A: "Mutant of LolA, a Lipoprotein-specific molecular chaperone of Escherichia coli, defective in the transfer of lipoproteins to LolB"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 287. 1125-1128 (2001)

Miyarnoto，A：“LolA 的突变体，一种大肠杆菌脂蛋白特异性分子伴侣，在脂蛋白向 LolB 的转移中存在缺陷”Biochem。

Fukuda, A.: "Amino-acylation of the N-terminal cysteine is essential for Lol-dependent release of lipoproteins from membranes but does not depend on lipoprotein sorting signals"J. Biol. Chem.. 277. 43512-43518 (2002)

Fukuda, A.：“N 端半胱氨酸的氨基酰化对于脂蛋白从膜上的 Lol 依赖性释放至关重要，但不依赖于脂蛋白分选信号”J.

Masuda, K.: "Elucidation of the function of lipoprotein-sorting signals that determine membrane localization"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 99. 7390-7395 (2002)

Masuda, K.：“阐明决定膜定位的脂蛋白分选信号的功能”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。