食環境感受性バイオモジュレーターとして機能するトランスグルタミナーゼの解析

作为食品环境敏感性生物调节剂的转谷氨酰胺酶的分析

• 批准号: 06660158
• 负责人: 伊倉 宏司
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06660158/
• 关键词: トランスグルタミナーゼ; インターロイキン-6; トランスグルタミナーゼ遺伝子; トランスグルタミナーゼ負電荷領域

本研究の目的は、動物組織を構成する各種細胞の多様な機能の制御に深く関係すると考えられるカルシウム依存性のタンパク質修飾酵素であるトランスグルタミナーゼ(TGase)の生理機能を分子レベルで理解し、食環境に起因する多様なシグナルが本酵素の機能を介した生体制御とどの様に連係しているかを解明することである。1.細胞情報伝達因子による遺伝子転写調節-多機能性サイトカインであるIL-6がヒト肝癌細胞株 HepG2 のTGase 遺伝子の発現を高めること、またモルモット肝 TGase 遺伝子の5'-上流領域にはIL-6応答配列様の塩基配列が存在することを明らかにしてきた。今回は、モルモット肝 TGase遺伝子5'-上流プロモーター領域のIL-6応答性を CAT レポーター遺伝子とHepG2 細胞を用いて解析した。IL-6は TGase 遺伝子のプロモーター活性を3-4倍増加させた。遺伝子の IL-6 応答部位は、塩基配列 -107 から +61 の領域に存在することが示唆された。細胞表面糖鎖による TGase 遺伝子発現調節の可能性をみるために、ガングリオシド GM3 を HepG2 細胞の培養液に添加して培養を行ったが、TGase 活性量は有意な変動を示さなかった。2.TGase 分子の構造と機能の関係-酵素分子の構造と機能の関係について理解を深めることは、酵素の新しい制御機構を知る手がかりをもたらす。TGase 分子ファミリーは複数の保存負電荷領域をもつ。2ケ所の保存負電荷領域と触媒機能との関係を理解するために、保存領域の負電荷を消失させた変異酵素分子を作製し、それらの触媒機能を解析した。検討した保存領域の負電荷は、活性発現に必須の構造要因ではないがカルシウムの結合性やアシル転移反応の進行に関連するものであることが示唆された。

The purpose of this study is to investigate the molecular mechanisms underlying the physiological functions of various cell types in animal tissue formation, to understand the mechanisms underlying the biological functions of TGases, and to clarify the mechanisms underlying the biological functions of TGases. 1. The expression of TGase gene in HepG2 cell line is highly regulated by IL-6, and the expression of TGase gene in HepG2 cell line is highly regulated by IL-6. The expression of TGase gene in HepG2 cell line is highly regulated by IL-6. Now, TGase gene 5'-upflow domain IL-6 response gene CAT gene HepG2 cell analysis IL-6 increased TGase activity by 3-4 fold. The IL-6 response site of the gene was-107 +61. The possibility of regulation of TGase gene expression in cell surface glycogen lock was investigated. The activity of TGase in HepG2 cell culture medium was changed by adding TGase gene to culture medium. 2. The relationship between structure and function of TGase molecule-The relationship between structure and function of enzyme molecule TGase molecules retain negative charge fields 2. To understand the relationship between the preservation of negative charge and catalytic function. The structural factors necessary for the preservation of negative charges in the field and the development of activity are:

项目成果

Koji Ikura: "Increase Caused by Interleukin-6 in Promoter Activity of Guinea Pig Liver Transglutaminase Gene" Bioscience,Biotechnology,and Biochemistry. 58. 1540-1541 (1994)

Koji Ikura：“白细胞介素 6 导致豚鼠肝脏转谷氨酰胺酶基因启动子活性增加”生物科学、生物技术和生物化学。

Koji Ikura: "Site-directed Mutation in Conserved Anionic Regions of Guinea Pig Liver Transglutaminase" Archives of Biochemistry and Biophysics. (印刷中). (1995)

Koji Ikura：“豚鼠肝脏转谷氨酰胺酶保守阴离子区域的定点突变”生物化学和生物物理学档案（1995 年）。