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Asp fI(18kDa)検出のためのELISAとPCR法の開発とその臨床応用

Asp fI (18kDa) ELISA和PCR检测方法的建立及其临床应用

基本信息

批准号：
06670619
负责人：
小林誠
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kochi Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670619/
关键词：
Asp f1 PCR DNA診断 Aspergillus fumigatsu

项目摘要

検体中の18kDa抗原(Aspf1)検出のためcapture antibodyとしてヴァージニア大学のDr.Arrhudaから供与を受けたモノクローナル抗体4A6を使用して,detector antibodyとして抗mitogillin(Asp f1と抗原性が共通)あるいは抗Aspf1家兎ポリク-ナル抗体を用いたELISAを組み立てたが,検体処理に問題があるのか非特異的な結果が得られた.一方患者尿を濃縮後SDS-PAGEでながしたのち転写しモノクローナル抗体4A6をprobeとしてウェスタン・ブロット法で観察する方法では侵入性アスペルギルス症(確定例+疑診例)10例中4例が陽性で検出可能であった.諸家の指摘のごとくELISAによる抗原検出法には限界があることが判明したので,PCRを用いてAspf1 geneの断片を検出するDNA診断の方向で検討を始めた.たまたま凍結保存されていた菌球が2個(剖検時と手術時に採取)あり,それからDNAを抽出して,PCRにかけた所,予想どおりのPCR産物が得られ,A.fumigatusが原因であることが判明した.Aspf1はA.fumigatusのvirulence factorの候補とされているのが.英国のグループはalkaline protease(ALP)をvirulence factorとして提唱していたので,ALPについてもPCRによる検出を試み,同様の結果が得られた.さらにこれらvirulence factorをtargetとしたPCR診断を肺アスペルギローマを中心にした患者から得られた喀痰をもとに検討をしており,95年日本胸部疾患学会総会(名古屋)ならびに95年ATSmeeting(シアトル)で発表の予定である。今後症例を増やして論文にする予定である.

The 18kDa antigen (Aspf1) was detector by a capture antibody from the antibody 4A6, which was used by Dr. Arruda of the University of California at San Francisco to detector anti-mitogillin (Aspf1 antigenicity) antibodies. One patient's urine was concentrated and SDS-PAGE was used to detect the invasive disease (confirmed case + suspected case) in 4 of 10 cases. The detection of Asp1 gene fragments by PCR is the first step in the development of DNA diagnosis. 2 bacteria balls were frozen and preserved (taken at autopsy and surgery). DNA was extracted and PCR products were expected to be obtained. A.fumigatus was identified as the cause of A.fumigatus. Aspf1 was identified as the candidate for A.fumigatus 'virulence factor. The ALP virulence factor was detected by PCR and the same results were obtained. In 1995, the Japan Chest Disease Association (Nagoya) and the Japan ATSmeeting(Nagoya) were established. The future of the disease is determined.