血管内皮細胞におけるトロンボモジュリン遺伝子の発現制御の研究

血管内皮细胞血栓调节蛋白基因表达调控研究

• 批准号: 06671077
• 负责人: 広沢 信作
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671077/
• 关键词: トロンボモジュリン; 血管内皮細胞; CATアッセイ; サイクリックAMP; プロモーター

トロンボモジュリン(thrombomodulin,TM)遺伝子について、我々の研究の実験結果から、5′側上流域にプロモーター活性に重要な種々のエレメント(Sp1,CAATボックス)が存在して、実際に機能していることが明らかにした。今回、cAMP反応エレメント(cAMP responsive element,CRE)に対する3′非翻訳領域(3′UT)の役割を遺伝子レベルで検討した。CAT(chloramphenicol acetyltransferase)遺伝子をレポーターとして、TM遺伝子のプロモーターを含むコンストラクトpTM-374CATにTM遺伝子の3′UTを挿入した。トランスフェクションはヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVECs)にリポフェクチンによる方法で行った。CREを含むコンストラクトではcAMPの添加によりCAT活性の増加がみられ、CREを欠くコンストラクトでは反応はみられなかった。これらの結果から+2092にcAMP反応エレメントが存在し、cAMPの添加により転写の活性が増加することが確認された。また、ゲルシフトアッセイでは+2092を含む合成オリゴヌクレオチドを用いると、cAMPで処理した細胞から抽出した核蛋白が結合することが明らかになった。これらのことより3′非翻訳領域に存在するcAMP反応エレメントがTMの発現に重要であることが明らかになった。また、ポリA付加部位より下流の領域が負の転写活性を有することも明らかになった。

The results of the study on thrombomodulin (TM) gene transfer showed that the important species of thrombomodulin (Sp1,CAAT) existed in the upper 5′-side watershed, and its function was obvious. This time, cAMP responsive element (CRE) is related to the 3′UT domain. CAT(chloramphenol acetyltransferase) gene is introduced into the 3′UT of TM gene. The method for screening umbilical vein endothelial cells (HUVECs) was developed. CRE contains cAMP, CAT activity, and CRE does not contain cAMP, CAT activity, and CAT activity. The results of this study are as follows: +2092 cAMP was present, cAMP was added, activity was increased, and this was confirmed. In addition to the above, we can also use cAMP to extract nuclear protein from cells. 3. The presence of cAMP in the non-inverted domain A negative writing activity exists in the downstream region of the cell.

项目成果

Ryushi Tazawa et.al.: "Presence of functional cyclic AMP responsive element in the 3′-untranslated region of the human thrombomodulin gene" Biochem Biophys Res Commun. 200. 1391-1397 (1994)

Ryushi Tazawa 等人：“人血栓调节蛋白基因 3-非翻译区中功能性环状 AMP 反应元件的存在”Biochem Biophys Res Commun. 200. 1391-1397 (1994)

Takatoshi Koyama et.al.: "All-trans retinoic acid vprequlates thrombomodulin and downrequlates tissve-factor expression in acute promyelocytic leukemia cells:distiact expression of the thrombomodulin and tissive factor in human leukemia cells" Blood. 84.

Takatoshi Koyama 等人：“全反式视黄酸在急性早幼粒细胞白血病细胞中预先调节血栓调节蛋白并下调组织因子表达：人白血病细胞中血栓调节蛋白和组织因子的不同表达”血液。