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粗面小胞体を用いたアルファ2プラスミンインヒビターの輸送障害のメカニズムの研究

利用粗面内质网研究α2纤溶酶抑制剂转运受损的机制

基本信息

批准号：
08671218
负责人：
広沢信作
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アルファ2プラスミンインヒビター(α2 plasmin inhibitor、以下α2PIと略す)は、線溶系の重要な因子である。日本の一家系の異常は、1塩基の挿入によるフレームシスにより、C末端の12個のアミノ酸が178個の別のアミノ酸に置換(α2PI-Nara)される。発現実験により、欠損症では粗面小胞体のレベルで変異蛋白の輸送が障害されていることが、今回、粗面小胞体の中における分解のメカニズムについて検討した。正常のα2PIとα2PI-NaraのcDNAを、T7のプロモーターを持つベクターpBlueScriptの下流に挿入し、mRNAを合成した。粗面小胞体の調製は、50A_<280> units/mlの最終濃度として使用した。合成したmRNAを網赤血球のライセ-トを用いたin vitro translationの系にて、翻訳を行い、25℃にて40分蛋白合成させた。変異蛋白(α2PLI-Nara)が正常蛋白より、明らかに分子量の大きな蛋白となるため、蛋白のサイズから移行を確認することができた。また、エンドグルコシダーゼHによる検討より糖鎖の負荷が5ヶ所に確認された。次に、粗面小胞体の小胞体内へ移行した正常ないし蛋白の小胞体内での処理機構について検討した。正常蛋白は翻訳移行後、30℃200分まで観察したが、分解は全くみられなかった。一方、変異蛋白は60分から分解がみられ、90分では、ほとんど分解された。変異蛋白の分解に対する温度の影響を検討したが、4℃、15℃ではほとんどみられなかった。本法法により、粗面小胞体における分解の検討が可能となった。変異蛋白の分解に関与するプロテアーゼについても検討中である。

The number of important factors (α 2 plasmin inhibitor, α 2PI below) and lysine (s) is very important. One Japanese pedigree is a regular family, and one base is enrolled in a total of 12 amino acids in the C-terminal. There are 178 α-2PI-Nara compounds in each family. This is the first time that the rough-faced small cell bodies have been broken down in the rough-faced small cell bodies. Normal α-2PI-α 2PI-Nara-cDNA, T7-2PI-Nara-cDNA, T7-pBlueScript, mRNA-synthesis. Rough-faced small cell bodies, 50A cells, 50A cells, 50A cells, 50 Synthesize mRNA, red blood cell, protein, protein. Protein (α 2PLI-Nara), normal protein, protein. Please make sure that you do not know what you are doing. In the secondary and rough-faced small cells, the migration in the small cells, the normal protein in the small cells and the normal protein in the small cells. After the normal protein was transferred, the normal protein was examined and decomposed at 30 ℃ for 200 minutes. On the one hand, the protein is 60 points, the protein is 60 points, the protein is 90 points, and the protein is 60 points. The protein is decomposed and the temperature is different. 4 ℃, 15 ℃, 4 ℃, 15 ℃. In this method, the rough-faced small cell body is broken down and may be broken down. The protein is broken down and the protein is broken down in the middle.