変異蛋白質のプロテアゾーム分解における糖鎖のトリミングの役割

聚糖修剪在突变蛋白蛋白酶体降解中的作用

• 批准号: 12670975
• 负责人: 広沢 信作
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12670975/
• 关键词: プラスミン インヒビター; 変異蛋白; マンノーストリミング; プロテアソーム; グルコーストリミング; ユビキチン

日本における2家系のプラスミンインヒビター欠乏症(PI-Nara、PI-Okinawa)の遺伝子変異を有する発現するベクターを導入して樹立したstable cell lineを用いて一連のパルスチェイス実験を行った。細胞は正常および2種類の変異PI蛋白(PI-Nara、PI-Okinawa)を発現している。ハイマンノース型の糖鎖(Glu3Man9GlNac2)のうち、グルコースのトリミングをおこなうグルコシダーゼを阻害するcastanospermine (CAS)あるいは、マンノースのトリミングに関与するmannojirimycin (MNJ)を用いた。プロテアソームの阻害剤としては、ALLNやラクタシスチンを使用した。正常PI蛋白は2時間以内に細胞から分泌され、1時間で既に分泌された。一方、2種類の変異蛋白は細胞内に留まり、半減期は大体4時間であった。ALLNあるいはLCTを添加すると、変異蛋白の分解は著明に阻害された。dMMの阻害の程度はLCTと同程度であった。dMMとLCTとの同時添加では阻害は相加的ではなかった。これらの結果から、マンノースのトリミングを阻害しても、プロテアソームによる分解を阻害しても結果としては共通の経路で阻害がおこっていると推測された。プロテアソームはユビキチン化された蛋白を分解するが、変異PI蛋白はユビキチン化されていなかった。CSTによりグルコーストリミングが阻害すると分解は著明に亢進した。正常蛋白と比較して、変異蛋白はカルネキシン(CNX)との結合時間と結合量が多かった。CST添加では、正常及び変異蛋白ともCNXとの結合が阻害された。以上より、変異蛋白はマンノースがはずれる(トリミング)と分解が開始されること、分解はプロテアソームでおこることが明らかにされた。グルコーストリミングが阻害されてもマンノーストリミングはおこり、プロテアソームで分解されることも明らかにされた。

Japan に お け る 2 family の プ ラ ス ミ ン イ ン ヒ ビ タ ー owe lack disease (PI - Nara, PI - Okinawa) の heritage 伝 son - different を す る 発 now す る ベ ク タ ー を import し て set し た stable cell line を with い て for の パ ル ス チ ェ イ ス be 験 を line っ た. The cells are <s:1> normal および, and two types of isomorphic PI proteins (pi-nara, pi-okinawa)を are present with <s:1> て る る る. Type ハ イ マ ン ノ ー ス の sugar lock (Glu3Man9GlNac2) の う ち, グ ル コ ー ス の ト リ ミ ン グ を お こ な う グ ル コ シ ダ ー ゼ を resistance against す る castanospermine (CAS) あ る い は, マ ン ノ ー ス の ト リ ミ ン グ に masato and す る mannojirimycin (MNJ)を use を た. Youdaoplaceholder0 プロテアソ ム <s:1> the damage inhibitor と タシスチ て を and ALLNやラ タシスチ タシスチ を を use た. Normal PI protein is secreted by に cells ら ら within に 2 time and by で に after 1 time. One, two types of variant proteins に in the cell に retain ま, and the half-reduction period に is approximately 4 times であった. ALLNある ある ある LCTを is added with すると, and the <s:1> decomposition of variant proteins is indicated by に inhibition of harm された. The degree of <s:1> obstruction <e:1> of dMM であった LCTと the same degree であった. dMMとLCTと と is simultaneously added with で <s:1> hindrance <e:1> and the addition of で <s:1> な な った った った. こ れ ら の results か ら, マ ン ノ ー ス の ト リ ミ ン グ を resistance against し て も, プ ロ テ ア ソ ー ム に よ る decomposition を resistance against し て も results と し て は common の で 経 road resistance against が お こ っ て い る と speculation さ れ た. プ ロ テ ア ソ ー ム は ユ ビ キ チ ン change さ れ を た protein decomposition す る が, - different PI protein は ユ ビ キ チ ン change さ れ て い な か っ た. CSTによ によ グ グ コ コ ストリ ストリ <s:1> <s:1> グが inhibition すると <s:1> prominent に hyperactivity た た. The normal protein と has a higher <s:1> binding time と binding amount が than that of the variant protein カ カ と ネキシ <e:1> (CNX) った. CST is added with で で, normal and び variant proteins と で CNXと <s:1> binding が to inhibit された. Above よ り, - different protein は マ ン ノ ー ス が は ず れ る (ト リ ミ ン グ) と decomposition が began さ れ る こ と, decomposition は プ ロ テ ア ソ ー ム で お こ る こ と が Ming ら か に さ れ た. グ ル コ ー ス ト リ ミ ン グ が resistance against さ れ て も マ ン ノ ー ス ト リ ミ ン グ は お こ り, プ ロ テ ア ソ ー ム で decomposition さ れ る こ と も Ming ら か に さ れ た.

项目成果

Chung D-C, et al.: "Mannose trimning directs degradation of mutant α2-plasmin inhibitor by proteasome."J Biol Chem. 275・7. 4981-4987 (2000)

Chung D-C 等人：“甘露糖修剪指导蛋白酶体降解突变型 α2-纤溶酶抑制剂。”J Biol Chem 275·7 (2000)。

Yoshinaga H, et al.: "A novel point mutation of the splicing donor site in the intron 2 of the plasmin inhibitor gene."Thromb Haemost. 84・. 307-311 (2000)

Yoshinaga H 等人：“纤溶酶抑制剂基因内含子 2 中剪接供体位点的新型点突变。” 84·307-311 (2000)。

広沢信作: "変異プラスミンインヒビターの分解-マンノーストリミングの重要性-"最新医学. 55・9. 138-148 (2000)

Shinsaku Hirosawa：“突变型纤溶酶抑制剂的降解-甘露糖修剪的重要性-”现代医学55・9（2000）。