B細胞リンパ腫に関与する遺伝子(BCL-6)の発癌への関与のメカニズムの研究

3番染色体上の遺伝子BCL-6は転写因子であるが、今回、BCL-6のプロモーター領域の解析、そして、BCL-6の結合するDNA塩基配列について検討した。BCL-6遺伝子の5'側上流、約3kbまでのフラグメントを用い、レポーターとしてはルシフェラーゼ遺伝子(LUC)を利用した。エレクトロポレーション法にて、バ-キット細胞株に導入して、48時間後に細胞を回収してLCU活性を測定した。pBCL-1318LucとpBCL-657Luc の2つのコンストラクトは高い活性を示した。一方、pBCL-989Lucの活性は比較的低かった。pBCL-133LucとpBCL-8Lcuとのプロモーター活性は非常に低値であった。-989から-658の領域には負に働くエレメントが存在し、-657から-134の領域がブロモーター活性に必要であることが判明した。この領域には、Sp1、GATA-1、AP-2などの反応エレメントが存在する。BCL-6蛋白の結合する塩基配列は、BCL-6のZnフィンガーとグルタチオンSトランスフェレース(glutathione S transferase,GST)との融合蛋白(B6ZF-GST)と、合成オリゴヌクレオチドを用いて検討した。オリゴヌクレオチドは中央に26bpの、ランダムな配列を有し、両端に18bpの既知の配列をもつ。B6ZF-GST蛋白に結合したオリゴヌクレオチドを両端の18bpをプライマーとしてポ-リメラーゼ反応(polymerase chain reaction,PCR)をかけて増幅した。同様のことを6回繰り返すし、増幅させたフラグメントをサブクローニングして、10個のクローンについて塩基配列を決定した。(T/A)NCTTTCNAGG(A/G)ATの14塩基に共通な塩基配列が認められた。これらのコンセンサス配列を有する遺伝子の発現を制御して、リンパ腫発症にも関与していると推測される。

3番染色体上の遺伝子BCL-6は転写因子であるが、今回、BCL-6のプロモーター領域の解析、そして、BCL-6の結合するDNA塩基配列について検討した。BCL-6遺伝子の5'側上流、約3kbまでのフラグメントを用い、レポーターとしてはルシフェラーゼ遺伝子(LUC)を利用した。エレクトロポレーション法にて、バ-キット細胞株に導入して、48時間後に細胞を回収してLCU活性を測定した。pBCL-1318LucとpBCL-657Luc の2つのコンストラクトは高い活性を示した。一方、pBCL-989Lucの活性は比較的低かった。pBCL-133LucとpBCL-8Lcuとのプロモーター活性は非常に低値であった。-989から-658の領域には負に働くエレメントが存在し、-657から-134の領域がブロモーター活性に必要であることが判明した。この領域には、Sp1、GATA-1、AP-2などの反応エレメントが存在する。BCL-6蛋白の結合する塩基配列は、BCL-6のZnフィンガーとグルタチオンSトランスフェレース(glutathione S transferase,GST)との融合蛋白(B6ZF-GST)と、合成オリゴヌクレオチドを用いて検討した。オリゴヌクレオチドは中央に26bpの、ランダムな配列を有し、両端に18bpの既知の配列をもつ。B6ZF-GST蛋白に結合したオリゴヌクレオチドを両端の18bpをプライマーとしてポ-リメラーゼ反応(polymerase chain reaction,PCR)をかけて増幅した。同様のことを6回繰り返すし、増幅させたフラグメントをサブクローニングして、10個のクローンについて塩基配列を決定した。(T/A)NCTTTCNAGG(A/G)ATの14塩基に共通な塩基配列が認められた。これらのコンセンサス配列を有する遺伝子の発現を制御して、リンパ腫発症にも関与していると推測される。