腎髄質部細いヘレンの上行脚の細胞内カルシウム調節機構の解析

肾薄海伦髓质升肢细胞内钙调节机制分析

• 批准号: 06671123
• 负责人: 根東 義明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671123/
• 关键词: ヘレンループ; Fura II; 顕微螢光測光; 尿細管; 腎髄質部; 細胞内カルシウム

ハムスター腎より微小単離したヘレンの細い上行脚(ATL)をin vitroで倒立顕微鏡下に灌流し、管腔側よりCa感受性蛍光色素Fura IIのアセトキシメチルエステルであるFura II-AMを負荷し、ATL細胞内にFurallを蓄積させた。顕微蛍光測光装置のOSP-3により細胞内Ca濃度を測定し、細胞外の溶液の条件を変えて細胞膜上のCa輸送体について検討を加えた。管腔側の溶液中よりCaを除去しても細胞内Ca濃度は変わらなかったが、基底膜側よりの除去では細胞内Caが低下し、ATL細胞の経細胞膜Ca透過性がおもに基底膜側にあることが明らかとなった。基底膜側のCa除去による細胞内Ca濃度の変化は同側の溶液中に加えられた低濃度のnicardipineにより完全に抑制され、基底側膜上にnicardipine感受性Caチャンネルが存在することが証明された。また、シアン化ナトリウムやcalmodulinにより、細胞内Caが著しく上昇し、calmodulin感受性Ca-ATPaseが存在することが明らかとなった。以上の実験結果から、ATLは管腔側膜にはCa透過性を持たず、基底側膜上に存在するCaチャンネルとCaポンプの相互作用により、細胞内Caが低く維持されていることが証明された。このことは、これらの輸送体に対する作用を持つホルモン等が存在するならば、細胞内Caのmodulatorとしての作用を持つ可能性を示唆している。また、Caの細胞内濃度の変化がこの部位の尿細管での最も重要な役割であるClの受動的再吸収を調節するという従来のわれわれの仮説を考えた場合、今後nicardipineやcalmodulin等の物質のCl輸送に対する検討が重要と考えられる。

从仓鼠肾脏中微分光度溶液的海伦的较薄的升肢（ATL）在倒置的显微镜下被灌注，并装有Fura II-AM，Fura II-AM，Ca-敏感的荧光染料fura fura fura II的乙酰氧基甲基酯，来自luminal侧，FURALL积累在ATL细胞中。使用OSP-3微荧光光度计测量细胞内Ca浓度，并通过更改细胞外溶液的条件来检查细胞膜上的Ca转运蛋白。尽管细胞内Ca浓度即使从腔侧的溶液中除去Ca，但从基底膜侧移除会降低细胞内CA，并且发现ATL细胞的跨细胞Ca渗透性主要在基底膜侧。由于添加到同侧溶液中的尼卡迪平的低浓度，由于去除基底膜上Ca而导致的细胞内Ca浓度的变化完全抑制了，并且证明尼古丁敏感的CA通道存在于基底膜上。此外，氰化钠和钙调蛋白显着增加了细胞内Ca，揭示了对钙调蛋白敏感的CA-ATPase的存在。上述实验结果表明，ATL在腔膜中没有Ca渗透性，并且由于基底膜和Ca泵上存在的Ca通道之间的相互作用，细胞内CA的保持较低。这表明，如果存在激素之类的激素对这些转运蛋白有影响，则可能充当细胞内CA的调节剂。此外，考虑到我们的常规假设，即CA的细胞内浓度的变化调节CL的被动重吸收，这是该部位小管中最重要的作用，因此认为研究尼卡丁胺和钙氟辛等物质的Cl运输非常重要。

项目成果

Takahashi et al: "Mechanism of cytosolic Ca^<2+>rogulation in the ascending thim limb of Henleloop of namster kidng" Kidney Int. (in press). (1995)

Takahashi 等人：“Namster Kidng 的 Henleloop 升支中胞质 Ca^2 > 调节的机制”Kidney Int。