腎髄質部細いヘンレの上行脚の細胞内pH調節機構の解析

Henle升肢即狭窄肾髓质的细胞内pH调节机制分析。

• 批准号: 05770508
• 负责人: 根東 義明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770508/
• 关键词: 細いヘンレの上行脚; 細胞内pH; アミロライド; Na; h交換輸送体; プロトンポンプ; Bartter症候群

腎髄質部細いヘンレの上行脚(以下ATL)をハムスター腎より微小単離し、例立顕微鏡上にセットさせた灌流槽に移した上で、マイクロマニピュレーターを用いて管腔内を微小灌流した。ATLの外液側に2uMのBCECF/AMを加え、室温にて30分間ATLをインチュベートし、BCECFをATL細胞内にトラップさせた。さらに、オリンパスのOSP-3装置を用いて、ATL内BCECFを励起し、コンピュータ解析により、細胞内pHを経時的に測定した。定常状態でHepes緩衝リンゲル液中においてATLの細胞内pH(以下pHi)は7.05だった。溶液側のpHを低下させると細胞内pHも低下したが、管腔内pHを下げた際のpHiの低下は小さく、ATLのpHiが主に血管側のpHに依存していることがわかった。ATLの血管側のpHi調節系のメカニズムを明らかにするため、血液側のナトリウムイオンを除去するとpHiはすみやかに6.9以下に低下し、同側にアミロライド0.1mMを加えた場合にもpHiは同程度の低下を示した。NH_4CL loading法により、ATL細胞内酸負荷をおこなり、pHiの回復期の回復速度を観察したが、血液側のNaイオン除去と0.1mMアミロライドはいずれも回復を強く抑制し、Hポンプ抑制薬のN-エチルアレイマイドは回復速度に影響を与えなかった。さらにNEM(N-エチルマレイマイド)自体は定常状態でのpHiに対しては管腔側からも血液側からも変化をおこさなかった。これらの実験結果は、C0_2/HCO_3カロリンゲル液中でも同様に認められた。また、ATL外溶液中よりのKイオンの除去もpHiには影響を与えないことが明らかとなった。以上のことからATLのpHiは血液側に存在するNa/H交換輸送系(アミロライド感受性)により主に調節されており、HポンプやH/K交換ポンプはほとんど存在していないとの結論に達した。

The ascending foot (the following ATL) is used to isolate the microphone, the perfusion trough is moved up, the perfusion tank is moved up, and the microperfusion is used. The external solution of ATL is 2uM BCECF/AM, the temperature of room temperature is 30 minutes, the temperature of ATL is 30 minutes, and the intracellular temperature of BCECF is ATL. The OSP-3 device is used to determine the temperature of the OSP-3 device, the BCECF trigger in the ATL, the analyzer, and the intracellular pH in the OSP-3. In the steady state, the intracellular pH (the following pHi) is 7.05mg

项目成果

Ito et al: "Insulin stimulates NaCl transport in the isolated perfueed mednllary TAL of Henles loop" Am.J Physiol.(Reral Fluidctislyte physiol.)in press.

Ito 等人：“胰岛素刺激 Henles 环的分离灌注髓质 TAL 中的 NaCl 转运”Am.J Physiol.(Reral Fluidctislyte physiol.) 正在出版。