腎髄質部細いヘンレの上行脚の細胞内pH調節機構の解析

Henle升肢即狭窄肾髓质的细胞内pH调节机制分析。

• 批准号: 05770508
• 负责人: 根東 義明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770508/
• 关键词: 細いヘンレの上行脚; 細胞内pH; アミロライド; Na; h交換輸送体; プロトンポンプ; Bartter症候群

腎髄質部細いヘンレの上行脚(以下ATL)をハムスター腎より微小単離し、例立顕微鏡上にセットさせた灌流槽に移した上で、マイクロマニピュレーターを用いて管腔内を微小灌流した。ATLの外液側に2uMのBCECF/AMを加え、室温にて30分間ATLをインチュベートし、BCECFをATL細胞内にトラップさせた。さらに、オリンパスのOSP-3装置を用いて、ATL内BCECFを励起し、コンピュータ解析により、細胞内pHを経時的に測定した。定常状態でHepes緩衝リンゲル液中においてATLの細胞内pH(以下pHi)は7.05だった。溶液側のpHを低下させると細胞内pHも低下したが、管腔内pHを下げた際のpHiの低下は小さく、ATLのpHiが主に血管側のpHに依存していることがわかった。ATLの血管側のpHi調節系のメカニズムを明らかにするため、血液側のナトリウムイオンを除去するとpHiはすみやかに6.9以下に低下し、同側にアミロライド0.1mMを加えた場合にもpHiは同程度の低下を示した。NH_4CL loading法により、ATL細胞内酸負荷をおこなり、pHiの回復期の回復速度を観察したが、血液側のNaイオン除去と0.1mMアミロライドはいずれも回復を強く抑制し、Hポンプ抑制薬のN-エチルアレイマイドは回復速度に影響を与えなかった。さらにNEM(N-エチルマレイマイド)自体は定常状態でのpHiに対しては管腔側からも血液側からも変化をおこさなかった。これらの実験結果は、C0_2/HCO_3カロリンゲル液中でも同様に認められた。また、ATL外溶液中よりのKイオンの除去もpHiには影響を与えないことが明らかとなった。以上のことからATLのpHiは血液側に存在するNa/H交換輸送系(アミロライド感受性)により主に調節されており、HポンプやH/K交換ポンプはほとんど存在していないとの結論に達した。

Kidney marrow interstitium fine い ヘ ン レ の on lines (ATL) を ハ ム ス タ ー renal よ り tiny 単 from し, case 顕 micro mirror に セ ッ ト さ せ た perfusion slot に move し た で, マ イ ク ロ マ ニ ピ ュ レ ー タ ー を with い て tube cavity を tiny perfusion し た. ATL の outside liquid side に 2 um の BCECF/AM を え, room temperature に て 30 points between the ATL を イ ン チ ュ ベ ー ト し, BCECF を ATL cell に ト ラ ッ プ さ せ た. さ ら に, オ リ ン パ ス の を OSP - 3 device with い て, ATL BCECF を excitation し, コ ン ピ ュ ー タ parsing に よ り, intracellular pH を 経 に determination of し た. In the stationary state of でHepes buffered リ リ ゲ ゲ fluid, the intracellular pH(hereinafter pHi) of ATL <s:1> cells is 7.05だった. Low side の solution pH を さ せ る と low intracellular pH も し た が, under the pipe cavity pH を げ た interstate の pHi の low は small さ く, ATL の pHi が に vascular lateral の pH に dependent し て い る こ と が わ か っ た. ATL の vascular side の pHi adjustment is の メ カ ニ ズ ム を Ming ら か に す る た め, blood side の ナ ト リ ウ ム イ オ ン を remove す る と pHi は す み や か に low below 6.9 に し, ipsilateral に ア ミ ロ ラ イ ド を add 0.1 mM え た occasions に も pHi は with low degree の を shown し た. NH_4CL Loading method に よ り acid, ATL cell load を お こ な り, pHi の reply period の regen を 観 examine し た が, blood side の Na イ オ ン remove と 0.1 mM ア ミ ロ ラ イ ド は い ず れ も reply を strong く inhibit し, H ポ ン プ inhibit 薬 の N - エ チ ル ア レ イ マ イ ド は regen に influence を and え な か っ た. さ ら に NEM (N - エ チ ル マ レ イ マ イ ド) autologous は steady state で の pHi に し seaborne て は lumen side か ら も blood side か ら も variations change を お こ さ な か っ た. The experimental results of <s:1> れら <s:1> are the same as those of C0_2/HCO_3カロリ カロリ ゲ ゲ in the solution. Youdaoplaceholder4 recognize められた. Youdaoplaceholder0, in the solution outside ATL, the よ <s:1> <s:1> of the <s:1> K web, the <s:1> of <s:1> is removed from the に of pHi, the に is affected by を and the えな とが とが とが とが とが とが is とが. Above の こ と か ら ATL の pHi は blood side に exist す る Na/H exchange transmission system (ア ミ ロ ラ イ ド susceptibility) に よ り main に adjust さ れ て お り, H ポ ン プ や H/K exchange ポ ン プ は ほ と ん ど exist し て い な い と の conclusion に da し た.

项目成果

Ito et al: "Insulin stimulates NaCl transport in the isolated perfueed mednllary TAL of Henles loop" Am.J Physiol.(Reral Fluidctislyte physiol.)in press.

Ito 等人：“胰岛素刺激 Henles 环的分离灌注髓质 TAL 中的 NaCl 转运”Am.J Physiol.(Reral Fluidctislyte physiol.) 正在出版。