腎髄質部細いヘンレの上行脚の細胞内pH調節機構の解析

Henle升肢即狭窄肾髓质的细胞内pH调节机制分析。

• 批准号: 05770508
• 负责人: 根東 義明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770508/
• 关键词: 細いヘンレの上行脚; 細胞内pH; アミロライド; Na; h交換輸送体; プロトンポンプ; Bartter症候群

腎髄質部細いヘンレの上行脚(以下ATL)をハムスター腎より微小単離し、例立顕微鏡上にセットさせた灌流槽に移した上で、マイクロマニピュレーターを用いて管腔内を微小灌流した。ATLの外液側に2uMのBCECF/AMを加え、室温にて30分間ATLをインチュベートし、BCECFをATL細胞内にトラップさせた。さらに、オリンパスのOSP-3装置を用いて、ATL内BCECFを励起し、コンピュータ解析により、細胞内pHを経時的に測定した。定常状態でHepes緩衝リンゲル液中においてATLの細胞内pH(以下pHi)は7.05だった。溶液側のpHを低下させると細胞内pHも低下したが、管腔内pHを下げた際のpHiの低下は小さく、ATLのpHiが主に血管側のpHに依存していることがわかった。ATLの血管側のpHi調節系のメカニズムを明らかにするため、血液側のナトリウムイオンを除去するとpHiはすみやかに6.9以下に低下し、同側にアミロライド0.1mMを加えた場合にもpHiは同程度の低下を示した。NH_4CL loading法により、ATL細胞内酸負荷をおこなり、pHiの回復期の回復速度を観察したが、血液側のNaイオン除去と0.1mMアミロライドはいずれも回復を強く抑制し、Hポンプ抑制薬のN-エチルアレイマイドは回復速度に影響を与えなかった。さらにNEM(N-エチルマレイマイド)自体は定常状態でのpHiに対しては管腔側からも血液側からも変化をおこさなかった。これらの実験結果は、C0_2/HCO_3カロリンゲル液中でも同様に認められた。また、ATL外溶液中よりのKイオンの除去もpHiには影響を与えないことが明らかとなった。以上のことからATLのpHiは血液側に存在するNa/H交換輸送系(アミロライド感受性)により主に調節されており、HポンプやH/K交換ポンプはほとんど存在していないとの結論に達した。

从仓鼠肾脏将肾脏髓质的细小上升肢（ATL）微固定，转移到显微镜上的灌注罐中，并使用微型操纵器在管腔内部的微孔液。将2UM BCECF/AM添加到ATL的外溶液侧，并在室温下插管ATL 30分钟，然后将BCECF捕获在ATL细胞内。此外，使用奥林巴斯OSP-3设备激发了ATL中的BCECF，并通过计算机分析来测量细胞内pH。 ATL的细胞内pH（以下简介）在HEPES缓冲林格的溶液中为7.05。当溶液侧的pH降低时，细胞内pH值也会减少，但是当降低腔内pH值时，ATL中的PHI很小，发现ATL中的PHI主要取决于血管侧的pH值。为了阐明ATL血管侧的PHI调节系统的机制，当去除血侧的钠离子时，将PHI迅速降低至6.9以下，并且将0.1 mM Amiloride添加到Ipsildient侧时，PHI降低到类似的水平。使用NH_4CL加载方法，进行了ATL细胞内酸负荷，并在恢复阶段观察到PHI的恢复速率。然而，在血液侧的去除和0.1 mM amiloride都强烈抑制了恢复，而H-PUMP抑制剂N-乙基酰胺对恢复率没有影响。此外，NEM（N-乙基马拉耶酰亚胺）本身在稳定状态下没有从腔或血侧变为PHI。在C0_2/HCO_3 Carolinger的解决方案中类似地观察到了这些实验结果。还揭示了从外部ATL溶液中去除K离子不会影响PHI。从以上结论得出的结论是，ATL的PHI主要由血液侧的Na/H交换传输系统（淀粉样蛋白酶灵敏度）调节，并且几乎没有H泵或H/K交换泵。

项目成果

Ito et al: "Insulin stimulates NaCl transport in the isolated perfueed mednllary TAL of Henles loop" Am.J Physiol.(Reral Fluidctislyte physiol.)in press.

Ito 等人：“胰岛素刺激 Henles 环的分离灌注髓质 TAL 中的 NaCl 转运”Am.J Physiol.(Reral Fluidctislyte physiol.) 正在出版。