プロタミンの循環動態に対する抑制機序:特にカテコールアミン分泌及びイオンチャンネルにおける解析

鱼精蛋白对血流动力学的抑制机制：儿茶酚胺分泌及离子通道分析

• 批准号: 06671560
• 负责人: 柳原 延章
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671560/
• 关键词: カテコールアミン遊離; 細胞内情報伝達; 循環抑制; 電位依存性Ca^<2+>チャンネル; 電位依存性Na^+チャンネル; ニコチン性アセチルコリン受容体-イオンチャンネル; 副腎髄質; プロタミン

プロタミンは、臨床においてヘパリンの拮抗薬として幅広く使用されている。その副作用として血圧低下、ショック様の症状などの循環抑制があり使用上問題となることがある。その原因として心臓への直接的抑制作用や、アレルギー反応、末梢血管拡張作用などが言われているが、結論を見ていない。著者らは以前より、培養ウシ副腎髄質細胞を交感神経系のモデルとして用い、カテコールアミン分泌及び生合成の調節機序について研究を行ってきた。そこで今回、この培養細胞でのプロタミンのカテコールアミン分泌,各種イオンチャンネル及び細胞内情報伝達経路に及ぼす影響について検討した。さらにこれらの影響をin vivoで確認する為に、ラットを用いてプロタミンの循環抑制効果を観察し、その時の血中カテコールアミン変動についても検討した。その結果、(1)プロタミン(10mg/kg)をラットに投与すると、動脈圧及び血中ノルアドレナリン量を有意に抑制した。これらプロタミンの作用はヘパリン(1000U/kg)前処置により消失した。次に培養副腎髄質細胞を使用した実験では、プロタミン(10-50μg/ml)はカルバコール及びベラトリジン刺激によるカテコールアミン分泌、^<45>Ca^<2+>流入そして^<22>Na^+流入をほぼ同じ濃度により抑制した。又56mMK^+刺激によるカテコールアミン分泌及び^<45>Ca^<2+>流入も抑制した。これらの結果よりプロタミンはラットにおいて交感神経からのノルアドレナリン遊離を低下させる事により、動脈圧を減少させる事が示唆された。このプロタミンの抑制機序としてニコチン性アセチルコリン受容体-イオンチャンネルや電位依存性Na^+チャンネルを介するNa^+流入及び電位依存性Ca^<2+>チャンネルを介したCa^<2+>流入等を阻害する事により、カテコールアミン遊離を抑制しているものと考えられた(これらの結果は、第41回日本麻酔学会総会及び第47会日本薬理学会西南部会にてすでに発表し、さらに現在The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeuticsへ論文として投稿準備中である)。(2)〜(3)さらにプロタミンの細胞内情報伝達経路に及ぼす影響を調べるため、副腎髄質細胞でのCa^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase IIに対する基礎的検討を行った。(4)〜(5)その他のカテコールアミン生合成・分泌の刺激剤とし、インターロイキン-1β(IL-1β)やC型ナトリウム利尿ペプチドによる影響についても検討した。(6)最後に全身麻酔薬イソフルランのカテコールアミン分泌及び各種イオンチャンネルに対する影響を調べプロタミンの作用と比較した。今後のプロタミンの循環動態抑制作用に対する研究として(1)プロタミンは分子量約8000-13000の塩基性蛋白複合体であることから、各種分離精製カラムで分離する事によりヘパリン拮抗作用とカテコールアミン分泌抑制作用の解離が出来ないかどうか検討する。(2)この分離したフラクションを用いて、循環動態に影響しないより選択的で安全なペパリン拮抗物質を見つけ出し臨床に役立てたいと考えている。(尚、上記(1)〜(6)は研究発表の雑誌論文に記載した順である)

In addition, the clinical application of anti-inflammatory drugs is also discussed. Side effects: low blood pressure, symptoms, circulatory inhibition, problems with use The causes include direct inhibition of heart failure, adverse reaction, peripheral vasodilation, and conclusion. The authors have been studying the regulation of the secretion and biosynthesis of the sympathetic nervous system in the past by culturing and cultivating them. In this paper, the culture of cells in the present day, such as cell secretion, various types of cell production and intracellular information transmission pathway and the impact of the detection. The effects of this in vivo are identified as the effects of cycle inhibition in vivo, and the effects of cycle inhibition in vivo are investigated. The results are as follows: (1) The concentration of vitamin C (10mg/kg) in the serum was intentionally suppressed by the concentration of vitamin C (10mg/kg). The effect of this treatment is to eliminate the effects of the previous treatment (1000U/kg). In addition, the use of culture medium (10-50μg/ml) to stimulate the secretion of Ca ^&lt;2 +<45>&gt;, Na ^+ and Na^+ in the culture medium inhibited the secretion of Ca^&lt;2+<22>&gt;. 56mMK^+ stimulates the secretion and influx of <45>Ca^+. The results of this study are as follows: 1. The blood pressure of the patient is reduced, and 2. The blood pressure of the patient is reduced. The mechanism of inhibition of Ca ~(2 +) in the process of Na ~(2 +) influx and Ca ~(2 +) potential dependence of Na ~(2+) influx is discussed.(The results of this paper are presented at the 41st General Meeting of the Japanese Society of Pharmacology and the 47th Southwestern Meeting of the Japanese Society of Pharmacology. (2)~(3) The intracellular signaling pathway and its influence on the regulation of Ca^&lt;2+&gt;/calmodulin-dependent protein kinase II in the renal cytoplasm were investigated. (4)~(5) The effects of different factors on the synthesis and secretion of IL-1 β(IL-1β) and IL-1β are discussed. (6)Finally, the effects of systemic anesthesia on the secretion and development of various drugs were compared. In the future, the study on the inhibition of circulation dynamics of protopril is as follows: (1) The basic protein complex with molecular weight of about 8000-13000 is isolated from various purified proteins, and the antagonistic effect of protopril on secretion inhibition is discussed. (2)The separation of these substances is a process that affects the safety and safety of the selected substances. (Shang, Shangji (1)~(6)) Research and development of the journal paper records the following:

项目成果

Nlbuyuki Yanagihara: "Stimulatory effect of IL-1β on catecholamine secretion from cultured bovine adrenal medullary cells" Biochemical and Biophysical Research Communications. 198. 81-87 (1994)

Nlbuyuki Yanagihara：“IL-1β 对培养的牛肾上腺髓质细胞分泌儿茶酚胺的刺激作用”《生物化学和生物物理研究通讯》198. 81-87 (1994)。

Masato Tsutsui: "C-Type natriuretic peptide stimulates catecholamine synthesis through the accumulation of cyclic GMP in cultured bovine adrenal medullary cells" The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 268. 584-589 (1994)

Masato Tsutsui：“C 型利钠肽通过培养的牛肾上腺髓质细胞中环 GMP 的积累刺激儿茶酚胺合成”《药理学和实验治疗学杂志》。

Nobuyuki Yanagihara: "Occurrence and activation of Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase II and its endogenous substrates in bovine adrenal medullary cells" Molecular Pharmacology. 46. 423-430 (1994)

Nobuyuki Yanagihara：“Ca^2/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II及其内源性底物在牛肾上腺髓质细胞中的发生和激活”分子药理学。

Kouichiro Minami: "Inhibitory michanism of protamine on catecholamine secretion" Japanese Journal of Pharmacology. 67. 268 (1995)

Kouichiro Minami：“鱼精蛋白对儿茶酚胺分泌的抑制机制”日本药理学杂志。

Masato Tsutsui: "Correlation of activation of Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase II with catecholamine secretion and tyrosine hydroxylase activation in cultured bovine adrenal medullary cells" Molecular Pharmacology. 46. 1041-1047 (1994)

Masato Tsutsui：“培养的牛肾上腺髓质细胞中Ca 2+ /钙调蛋白依赖性蛋白激酶II的激活与儿茶酚胺分泌和酪氨酸羟化酶激活的相关性”分子药理学。