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原田病の分子免疫学的研究

原田病的分子免疫学研究

基本信息

批准号：
06671748
负责人：
山木邦比古
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671748/
关键词：
原田病特異抗原 cDNAクローニングメラノサイト特異蛋白質

项目摘要

文部省科学研究費の補助を受けVKH disease(原田病)に特異的な抗原の解析を行ってきたが、本年度の研究で明らかとなった点は以下のとうりである。1、melanocyteの可溶性成分の中では分子量約75KDa、等電点pH6.0の蛋白質がVKH diseaseに特異的な抗原であることは以前の我々の研究で指摘していたが、今回の研究ではこの蛋白質をmolecular cloningしDNA及びアミノ酸の配列を決定した。ホモロジーサーチでこの蛋白質はpropionile CoA carboxylaseと同一であることが判明した。propiomile CoA carboxylaseは全身の臓器に発現しておりmelanocyteにspecificに発現しているわけではない。しかしIDDMのモデルであるNODマウスでは全身に発現しているglutamate decarboxylaseがautoimmune respomseの最初の標的であり、この免疫反応に続いて様々なtissue non specific antigenに対して免疫反応が生じ、最終的にpancreatic β cellに特異的に存在する蛋白質が免疫反応の標的となることが報告されている。このことを考えるとpropionil CoA carboxylaseがVKH diseaseの免疫反応の最初の標的であるかいなかは別として免疫反応の標的の一つであると考えられる。現在更に患者数を増やし、この点についても検討中である。2、melanocyteの抗原の内、可溶性抗原については上記の如く検討しているが、melanocyteにはその他に不溶性(SDS可溶性)抗原とSDS不溶性抗原がある。一般的にSDS不溶性分画はcell debrisとされているが、melanocyteの場合にはこの分画にmelaninとこれに共有結合していると考えられている多数の蛋白質が含まれる。しかもこの分画はmelanocyteにspecilficに存在するものである。このことから不溶性分画の解析として最初にSDS不溶性成分の解析をおこなった。melanocyteのSDS不溶性分画は若干の所謂cell debrisを含むもののそのほとんどがmelanin顆粒と考えられるが、これはmelaninに多数の蛋白質がアトランダムに共有結合している形態のため、melaninに結合している蛋白質を直接分析することは困難である。我々は牛脈絡膜からmelanin顆粒を分離し、これに対するポリクローナル抗体を作製するとともに牛脈絡膜mRNAを分離し、cDNA libraryを作製した。この牛脈絡膜cDNA libraryを上記抗体でスクリーニングし、36個のcloneをえた。これらのcloneはsequencingされhomology searchがなされた。その結果lysozomal enzymeとhomologyのあるものの他は未知のsequenceであった。現在これらのcloneがmelanocyte specificに発現しているか否かをnorthan及びwestern blottingで検索中である。

The Ministry of Education and Science grants special antigen analysis for VKH disease(Harada disease), and this year's research will be carried out in the following ways. 1. The soluble components of melanocyte include protein with molecular weight of about 75KDa and isoelectric point of pH6.0, which is specific for VKH disease.ホモロジーサーチでこの蛋白质はpropionile CoA carboxylaseと同一であることが判明した。Propiomile CoA carboxylase is found in melanocyte specific tissues. NOD is reported to be the first target of immune response, the first target of immune response, and the second target of immune response, the first target of immune response, the third target of immune response, and the final target of immune response, the protein. The first target of immune response to VKH disease is propionil CoA carboxylase. Now the number of patients is increasing, and the number of patients is increasing. 2. The soluble and soluble antigens of melanocyte are not soluble (SDS soluble) antigens. In general, SDS insoluble fractions contain cell debris, melanocyte, and most proteins. This is a melanocyte. Analysis of insoluble components in SDS The SDS insoluble fraction of melanocyte is difficult to analyze directly for some so-called cell debris, including melanin particles, and for most melanin proteins. We isolated the choroid melanins and produced the choroid mRNA. The bovine choroid cDNA library contains 36 clones.これらのcloneはsequencingされhomology searchがなされた。The result of lysosomal enzyme homology is unknown. Now the clone is melanocyte specific.