19-DEJ-1抗原のcDNAクローニング

19-DEJ-1 抗原的 cDNA 克隆

• 批准号: 15659257
• 负责人: 清水 宏
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659257/
• 关键词: 19-DEJ-1抗原; cDNAクローニング; cDNAサブトラクション法; 表皮水疱症

19-DEJ-1抗体は1989年にProf.Jo-David Fine(現ノースカロライナ大学皮膚科教授)らが作製したヒト表皮細胞をマウスに免疫して得られたモノクローナル抗体である。この抗体は、ヒト皮膚基底膜部に存在する抗原に反応するが、その抗原に関しては未だ誰もクローニングには成功していないため本態は不明である。この抗体の極めてユニークな点は接合部型表皮水疱症では全ての病型で反応性が消失していることである。接合部型表皮水疱症はLaminin 5、α6β4 integrinあるいはBPAg2(Type XVII collagen)という3種類の異なる責任遺伝子によって発症しているのにもかかわらず全病型で19-DEJ-1抗体との反応性が消失していることは、この抗体が認識している抗原の特殊性、重要性を示唆するところであり、研究代表者は、この19-DEJ-1抗体が認識している分子、すなわち19-DEJ-1抗原が、未知の全く新しい皮膚基底膜分子であるとの仮説を立てるに至った。一方、19-DEJ-1抗原の同定およびcDNAクローニングに関しては、現在までに抗体の作成者であるDr.Fineらのグループが精力的に取り組んできたが、通常の大腸菌を用いたイムノスクリーニング法ではクローニングが極めて困難であり、基底膜部分子のコンフォメーショナルエピトープ、あるいは糖鎖抗原など大腸菌の発現系では再現できない抗原を認識している可能性が高いと考えられている。今回、研究代表者らは19-DEJ-1抗原が全ての接合部型表皮水疱症で発現が消失していることと、大腸菌を用いた発現系ではクローニングが困難であることから、cDNAサブトラクション法で候補遺伝子を絞り込んだ上で、コンフォメーショナルエピトープや糖鎖抗原の発現が可能なCOS細胞を用いた発現クローニング法を併用することで、19-DEJ-1抗原を同定できるとの着想に至った。これまでの研究で、cDNAサブトラクション法により、19-DEJ-1抗原のいくつかの候補遺伝子を絞り込むことができた。現在は発現クローニング法を用いてこれらの候補遺伝子についてスクリーニングを行っている最中である。

19-DEJ-1 Antibody 1989 Professor Jo-David Fine(currently Professor of Dermatology, University of Miami) The antibody is present in the basement membrane of the skin. This antibody is extremely resistant to epidermal blistering at the junction. It is completely resistant to disease. Epidermal blistering syndrome of junctional type Laminin 5, α6β4 integrin BPAg2 (Type XVII collagen) and three different types of responsible genes are responsible for the development of the disease. The anti-19-DEJ-1 antibody and its anti-resistance disappear. The antibody recognizes the specificity and importance of the antigen. The representative of the study believes that the 19-DEJ-1 antibody recognizes the molecule The 19-DEJ-1 antigen is unknown and completely new to the skin basement membrane molecule. For example, the identification of 19-DEJ-1 antigen and cDNA fragments are related to the production of antibodies. The identification of 19-DEJ-1 antigen and cDNA fragments is related to the production of antibodies. The identification of 19-DEJ-1 antigen and cDNA fragments is related to the production of antibodies. The possibility of recognizing the presence of carbohydrate lock antigen in E. coli is high. In this paper, the representative of the study, the 19-DEJ-1 antigen, was found to disappear in the whole junction type epidermal blister disease, and the development system of Escherichia coli was difficult to use. cDNA was used to detect the candidate gene. The 19-DEJ-1 antigen was identified and determined. This study was carried out by cDNA analysis, and candidate genes for 19-DEJ-1 antigen were identified. Now, we can use this method to select candidates.

项目成果

Liu Y, et al.: "Immunofluorescence studies using skin sections of recessive dystrophic epidermolysis bullosa patients indicated that the antigen of anti-p200 pemphigoid is not a fragment of type VII collagen."J Dermatol Sci. 32. 125-129 (2003)

Liu Y等人：“使用隐性营养不良性大疱性表皮松解症患者的皮肤切片进行的免疫荧光研究表明，抗p200类天疱疮的抗原不是VII型胶原蛋白的片段。”J Dermatol Sci。

Nakamura H, et al.: "The G2028R glycine substitution mutation in COL7A1 leads to marked inter-familiar clinical heterogeity in dominant dystrophic epidermolysis bullosa."J Dermatol Sci. (in press).

Nakamura H 等人：“COL7A1 中的 G2028R 甘氨酸取代突变导致显性营养不良性大疱性表皮松解症中显着的临床异质性。”J Dermatol Sci。

Masunaga T, et al.: "Pyloric atresia-junctional epidermolysis bullosa syndrome showing novel 594insC/Q425P mutations in integrin b4 gene (ITGB4)."Exper Dermatol. (in press).

Masunaga T 等人：“幽门闭锁-交界性大疱性表皮松解综合征显示整合素 b4 基因 (ITGB4) 中出现新的 594insC/Q425P 突变。”Exper Dermatol。

Kawasaki H, et al.: "Squamous cell carcinoma developing in a 12-year-old boy with non Hallopeau-Siemens recessive dystrophic epidermolysis bullosa."Br J Dermatol. 148. 1047-1050 (2003)

Kawasaki H 等人：“一名患有非 Hallopeau-Siemens 隐性遗传性营养不良性大疱性表皮松解症的 12 岁男孩患上鳞状细胞癌。”Br J Dermatol。

McMillan JR: "Ultarastructural orientation of laminin 5 in the epidermal basement membrane : an updated model for basement membrane organization."J Histochem Cytochem. 51. 1299-1306 (2003)

McMillan JR：“表皮基底膜中层粘连蛋白 5 的超结构取向：基底膜组织的更新模型。”J Histochem Cytochem。