AD患者の脳神経細胞に蓄積する酸化RNAに結合する蛋白のcDNAクローニング

与 AD 患者脑神经元中积累的氧化 RNA 结合的蛋白质的 cDNA 克隆

• 批准号: 13210109
• 负责人: 早川 浩
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13210109/
• 关键词: 酸化ストレス; 転写エラー; 異常蛋白; RNA結合蛋白; アルツハイマー病; 老化; 品質管理; Quality Control

酸化RNA(8oxoguanine-RNA)に特異的に、且つ強固に結合する蛋白を大腸菌およびマウス脳抽出液中に検出し、大腸菌についてはそのうちの1つがPolynucleotide phosphorylase(PNP蛋白)であることを同定、報告した。(Biochemistry 40,9977-9982 2001)。この遺伝子を欠損した変異株は、酸化ストレスを引き起こすパラコートに対して耐性となるが、遺伝子を導入すると感受性は元のレベルに回復した。このpnp遺伝子にホモロジーをもつ配列が、ESTデーターベース上に多数登録されていることが判ったので、pnp遺伝子情報を元に仮想配列を想定し、目的とするcDNAを決定し、そのDNAを入手した入手したものについて実際にDNA配列を決定したところ、ほぼ予想した配列に該当した。このcDNAからコードされると期待される蛋白の一次配列は大腸菌PNP蛋白と全域にわたってホモロジーがあった。これとは別に、直接結合活性を指標にヒト蛋白を生化学的に検索したところ、1ヶの蛋白を同定することができた。これは既知蛋白であるが、新たな結合活性を有することが明らかになった。

在大肠杆菌和小鼠脑提取物中检测到与氧化RNA（8oxoguanine-RNA）的特异性和牢固结合的蛋白质，对于大肠杆菌，其中一个被鉴定出来并报告了多核苷酸磷酸酶（PNP蛋白）。 （生物化学40,9977-9982 2001）。缺乏该基因的突变体对Paraquat具有抗性，会导致氧化应激，但是当引入基因时，其敏感性恢复到了原始水平。人们发现，许多与该PNP基因同源的序列已在EST数据库上注册，因此，当我们假设基于PNP基因信息的虚拟序列时，确定了靶cDNA，并实际上确定了获得的DNA的DNA序列，并且几乎是预期的序列。预计将从该cDNA编码的蛋白质的主要序列是大肠杆菌PNP蛋白质的同源性。另外，使用直接结合活性作为指标允许鉴定一种蛋白质的生化搜索人蛋白。尽管这是一种已知的蛋白质，但已显示其具有新的结合活性。

项目成果

Hiroshi Hayakawa et al.: "Specific Binding of 8-Oxoguanine Containing RNA to Polynucleotide Phosphorylase Protein"Biochemistry. 40. 9977-9982 (2001)

Hiroshi Hayakawa 等人：“含有 RNA 的 8-氧代鸟嘌呤与多核苷酸磷酸化酶蛋白的特异性结合”生物化学。