胎生期の脳形成過程におけるミクログリアの動態と機能の解明

阐明胚胎脑形成过程中小胶质细胞的动力学和功能

基本信息

批准号：
15H06277
负责人：
服部祐季
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-08-28 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、胎生期大脳におけるミクログリアの存在意義および神経系細胞産生への貢献について明らかにすることを目的とする。平成27年度は、以下の項目について成果を得た。(1)マウス大脳におけるミクログリアの分布と胎齢進行に伴う分布・動態変化を、切片免疫染色および脳原基スライス培養下でのライブ観察にて網羅的に調べたところ、胎生前期までは脳実質全体に散在するのに対し、胎生中期以降は神経系細胞の産生の場である脳室帯（VZ）／脳室下帯（SVZ）に集積する様子を捉えた。そこで、VZ/SVZに存在する神経系中間前駆細胞が発現する分子群に着目し、それらに対する阻害剤を用いた機能検証を進め、ミクログリアの移動・分布の規定に重要な分子を同定した。(2)ミクログリアが神経前駆細胞の産生・運命決定に寄与する可能性について検証した。in vivoでのToll様受容体（TLR）リガンド・薬剤投与によるミクログリアの活性化・除去による検討、セルソーターで回収したミクログリアと脳原基細胞の共培養実験から、ミクログリアがTbr2陽性の神経系中間前駆細胞の数を増す可能性が示された。(3)脳原基の細胞動態観察に頻用されるスライス培養ではin vivo環境を一定時間は維持するが、長時間に及ぶ観察では血管構造が破綻する等の問題が生じる。そこで、脳に損傷を与えることなく、より生理的な条件下で三次元モニタリングを可能にする「二光子顕微鏡を用いた胎仔脳内in vivoライブ観察法」の確立を目指し、試行を進めた。母体の拍動や羊水中の胎仔の動きに由来する揺動を抑えることのできる観察条件を整え、これまでに子宮越しでのミクログリアの継続したタイムラプス観察が約半日まで達成できている。得られた成果は、第9回神経発生討論会（ポスター）、第121回日本解剖学会総会全国学術集会（口演）で発表した。

这项研究旨在阐明小胶质细胞在胎儿脑阶段的重要性及其对神经系统细胞产生的贡献。在2015财年，我们在以下项目上取得了成果：（1）当我们研究小鼠大脑中小胶质细胞的分布和动态变化以及小鼠大脑年龄的分布和动态通过截面免疫染色和在脑部下的脑中的实时观察，我们观察到它们散布在整个脑部杂质的区域中，但散布在脑部繁殖中，但是（VZ）/室内区（SVZ），embryonic寿命后神经系统细胞的部位产生。因此，我们集中在VZ/SVZ中存在的中间神经系统祖细胞表达的一组分子上，并使用抑制剂进行了功能验证，以鉴定针对定义小胶质细胞迁移和分布重要的分子。（2）我们研究了小胶质细胞可能有助于神经祖细胞的产生和测定的可能性。在体内，小胶质细胞的激活和通过施用类似受体（TLR）配体和药物的给药，以及通过细胞分类器恢复的小胶质细胞和脑图细胞的共培养实验表明，小胶质细胞可能会增加TBR2阳性神经系统中间近代细胞的数量。（3）经常用于观察脑原始细胞动力学的切片培养物在一定时间段内保持体内环境，但长期观察结果会导致问题，例如诸如血管结构的崩溃。因此，我们的目的是建立“使用两光子显微镜在胎儿大脑中实时体内观察方法”，该方法允许在更大的生理条件下进行三维监测而不会造成脑部损伤。我们已经准备好观察条件，可以抑制羊水中的孕产妇节拍和胎儿的运动引起的挥杆，并能够通过子宫通过子宫进行连续的小胶质细胞观察，直到大约半天。获得的结果在第9个神经发生讨论（海报）和日本解剖学学会（口腔表现）的第121个国家学术会议上介绍。