イネ発生メカニズムの解明に向けた細胞タイプ別RNA単離法の確立

建立每种细胞类型的RNA分离方法，阐明水稻发育机制

• 批准号: 15H06835
• 负责人: 津田 勝利
• 金额: $ 0.92万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06835/
• 关键词: 育種学; 発生・分化; 遺伝学

<35S:FRおよび35S:FGRの作成と評価>リボソーム構成因子の一つであるRPL18遺伝子がイネゲノム中に３つ存在することを確認した。これら３遺伝子についてデータベースサーチを行い、ユビキタスに高発現しているイネRPL18遺伝子(Os05g0155100, 以下RPL18)を同定した。35S:FLAG-RPL18(35S:FR)に加えて、組織特異的プロモーター制御下でRPL18を発現させた際にGFPなどの蛍光タンパク質により発現場所を可視化できるかも検討するため、35S:FLAG-GFP-RPL18(35S:FGR)融合タンパク質発現ベクターを作成し、イネへ形質転換により導入した。作成した形質転換イネの生育状態・稔性を調査した結果、35S:FRは野生型イネと同等の生育・稔性を示したのに対し、35S:FGRは矮性・低稔性を示したことから、RPL18へのGFPの融合が、内在性のリボソームの働きに悪影響を及ぼしていることが考えられた。したがって、TRAPの条件検討には35S:FRを用いる。<生殖細胞および維管束特異的TRAPコンストラクトの作成>MEL1およびOshox1は、生殖細胞および維管束で特異的に発現することが確認されている。まず、これらの遺伝子全体および上流・下流約3kbを含むゲノム断片をクローニングした。さらに、上記35S:FRコンストラクトから、FLAG-RPL18-Nos terminator領域をクローニングし、MEL1およびOshox1のゲノム領域の開始コドンの位置に挿入したコンストラクトを作成した。現在これらTRAPコンストラクトを形質転換によりイネに導入中である。

<35S:FR> 35S:FGR> 1 of the components of the RPL18 gene is confirmed to exist in 3 of the components of the RPL. RPL18 (Os05g0155100, below RPL18) is also determined. 35S: FLAG-RPL18 (35S:FR) is added, tissue-specific fluorescence is controlled, RPL18 is displayed, GFP is displayed, fluorescence is displayed, field visualization is displayed, 35S:FLAG-GFP-RPL18 (35S:FGR) fusion is displayed, fluorescence is displayed, and shape is changed. 35S:FR, 35S: FR The condition of TRAP is discussed in 35S:FR. <Production of germ cell and vascular bundle specific TRAP receptor>MEL1 and Oshox1, germ cell and vascular bundle specific receptor The total length of the vector is about 3kb, including the length of the vector. In addition, the above 35S:FR terminal is selected from the FLAG-RPL18-Nos terminal field, MEL1 and Oshox1, and the position of the starting terminal in the terminal field is selected from the FLAG-RPL18-Nos terminal field. Now, we're talking about the quality of the product.