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ダイレクトリプログラミングによる聴神経の再生

通过直接重编程实现听觉神经再生

基本信息

批准号：
15H06911
负责人：
西村幸司
金额：
$ 1万
依托单位：
Research Institute, Shiga Medical Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-08-28 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06911/
关键词：
一次聴神経細胞 FACS RT-PCR 免疫組織化学

项目摘要

生後1日目のTau-GFPマウスのラセン神経節をトリプシンで単細胞化してFACSによる細胞選別を行い、FACSの妥当性を確認した。Tau-GFP陽性細胞とTau-GFP陰性細胞からRNAを抽出し、RT-PCRを行った。Tau-GFP陽性細胞は既知の神経マーカーbeta-III tubulin, MAP2が陽性、ラセン神経節の神経細胞に陽性とされる転写因子GATA3陽性、typeII ラセン神経節マーカーperipherin陽性であった。また、Tau-GFP陰性細胞はSox2陽性、神経堤由来細胞マーカーSox10陽性、fibroblastマーカーfibronectin陽性であった。またシュワン細胞特異的マーカーのp75はTau-GFP陽性細胞とTau-GFP陰性細胞双方に発現しており、p75はシュワン細胞のみならず神経細胞にも発現を認めたと考えられた。また、幹細胞マーカーのSox2は生後のラセン神経節の神経細胞には発現を認めないことを確認し、生後のラセン神経節の神経細胞が自発的に再生しない理由の一つと考えられた。神経堤由来細胞マーカーSox10のレポーターマウスSox10-IRES-Venusマウスの内耳における組織評価を行うべく、実験材料を準備した。胎生10.5, 12,75, 13,5, 15, 17, 生後1, 6, 14日目の内耳の凍結組織切片を作成し、Sox10, Sox2, beta III tubulin, peripherin, GATA3による免疫組織化学を行い、共焦点顕微鏡で画像取得を予定している。

Postnatal 1 eye の Tau - GFP マウスのラセン god 経 section をトリプシンで単 cellular して both FACS による cell line separating をい, both FACS の justice を confirm した. Tau-gfp-positive cells と tau-GFp-negative cells らRNAを extraction を RT-PCRを for った. Tau-gfp-positive cells カ known parathyroid カカ beta III tubulin, MAP2が positive, ラセ <s:1> parathyroid に positive とされる転 writing factor GATA3 positive, typeII ラセ <s:1> parathyroid <s:1> カ peripherin positive であった. Youdaoplaceholder0, tau-GFP-negative cells また sox2-positive, neurogenic cells カカ sox10-positive, fibroblast カカ fibronectin positive であった. またシュワン cell specific マーカーの p75 は Tau - GFP positive cells と Tau - GFP negative cells both に発 now しており, p75 はシュワン cells のみならず god 経 cells にも発を now recognize めたと exam えられた. また, stem cells マーカーの Sox2 は postnatal のラセン god section 経の経 cells には発を now recognize めないことを after confirm し, のラセン god section 経の経 cells が since 発に renewable しない reason の a つと exam えられた. God 経 dike origin cells マーカー Sox10 のレポーターマウス Sox10 IRES - Venus マウスの inner ear における organization review 価を line うべく, be を験 materials prepared した. At 10.5, 12,75, 13,5, 15, 17 days after birth, 1, 6, 14 days after birth, the tissue sections of the frozen tissue of the inner ear of the を were prepared as を, Sox10, Sox2, beta III tubulin, peripherin GATA3による immunohistochemistry を performed を and confocal 顕 micromirror で imaging obtained を predefined <s:1> てるるるる.