CD109を応用した口腔扁平上皮癌早期発見のための新規診断マーカーの探究

使用 CD109 探索用于早期检测口腔鳞状细胞癌的新诊断标记物

• 批准号: 21890103
• 负责人: 萩原 純孝
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890103/
• 关键词: CD109; TGF-βシグナル; 細胞増殖; 扁平上皮癌

1.CD109高発現株の樹立とその形質についての検討FLAG付加型ヒトCD109遺伝子をHEK293細胞に導入して高発現株をコントロール株とともに樹立した。細胞増殖能をWST-1法にて評価したところ細胞増殖はCD109高発現293細胞において有意に亢進していた。浸潤能については再現性もって有意な相違を示すことができなかった。2.CD109相互作用タンパク質の同定樹立したCD109高発現株から細胞溶解液を精製し、抗FLAG抗体を用いた免疫沈降法を行った。免疫沈降産物をアクリルアミドゲル電気泳動で分離後、銀染色を行ったところ80kDa以上の高分子領域に共沈タンパク質と思われる複数のバンドを確認した。トリプシン消化法でLC/MS質量分析を行ったが有力なペプチドを同定することができなかった。肺扁平上皮癌細胞株SK-MES-1で同様の実験を行ったところTGF-β前駆タンパクであるLTBP-1が同定された。3.CD109高発現が及ぼす遺伝子発現変化の検討293-CD109高発現株およびコントロール株からメッセンジャーRNAを抽出した。当初は同検体をDNAマイクロアレイ解析へ外注予定であったが、金銭的な理由から来年度へ先送りすることとした。4.シグナル伝達変化の検討樹立したCD109高発現株およびコントロール株をTGF-β1で刺激し、下流分子Smadのリン酸化をウェスタンブロッティングで評価したところ、CD109の高発現がSmadのリン酸化を有意に減弱させ、さらに下流のP21の産生誘導まで抑制していることが分かった。細胞増殖が亢進することを裏付ける結果が得られた。同様にEGFの刺激実験を行ったが、下流分子(AKT/MAPK)のシグナルに明らかな変化は認められなかった。

1. High CD109 発 strains の now set と そ の character に つ い て の 検 please FLAG type plus ヒ ト CD109 posthumous son 伝 を HEK293 cells に import し て high 発 now strains を コ ン ト ロ ー ル strains と と も に set し た. Method cells raised colonization を WST - 1 に て review 価 し た と こ ろ cells raised colonization は CD109 high 発 now 293 cells に お い て intentionally に hyperthyroidism し て い た. Can infiltrate に つ い て は reproducibility も っ て intentionally な を deemed in す こ と が で き な か っ た. 2. The interaction between CD109 タ ン パ ク qualitative の be set し た CD109 high 発 now strains か ら lysis liquid を refined し, resistance to FLAG antibody を with い た immune sink line method を っ た. Immune sink product を ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル electricity after bathing 気 で separation line, silver staining を っ た と こ ろ above 80 kda に の polymer field were shen タ ン パ ク qualitative と think わ れ る plural の バ ン ド を confirm し た. ト リ プ シ ン digestion method で LC/MS line quality analysis を っ た が powerful な ペ プ チ ド を with fixed す る こ と が で き な か っ た. SK - lung squamous cell cancer cells で MES - 1 with others の be 験 を line っ た と こ ろ TGF - before the beta 駆 タ ン パ ク で あ る が LTBP - 1 set with さ れ た. 3. High CD109 発 が and now ぼ す heritage 伝 発 son now - the の 検 for 293 - high CD109 発 now strains お よ び コ ン ト ロ ー ル strains か ら メ ッ セ ン ジ ャ ー RNA を spare し た. は with original 検 body を DNA マ イ ク ロ ア レ イ parsing へ note outside designated で あ っ た が な reason, gold 銭 か ら to deliver annual へ first り す る こ と と し た. 4. シ グ ナ ル 伝 da - turn の 検 please set し た CD109 high 発 now strains お よ び コ ン ト ロ ー ル strains を TGF - beta 1 で stimulation し, low molecular Smad の リ ン acidification を ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ で review 価 し た と こ ろ, CD109 の high 発 now が Smad の リ ン acidification を intentionally weakened に さ せ, さ ら に obscene の P21 <s:1> induces まで inhibits て て る る とが とが score った った. Cell proliferation が hyperactivity する とを とを results in ける outcome が られた. Line with others in に EGF の stimulus be 験 を っ た が, low molecular (AKT/MAPK) の シ グ ナ ル に Ming ら か な variations change は recognize め ら れ な か っ た.

项目成果

口腔癌におけるCD109の発現と生物学的機能の解析

CD109在口腔癌中的表达及生物学功能分析

• 发表时间: 2009
• 作者: S Hagiwara;Y Murakumo;S Mii;T Shigetomi;N Yamamoto;H Furue;M Ueda;M Takahashi;萩原純孝
• 通讯作者: 萩原純孝

Processing of CD109 by furin and its role in the regulation of TGF-β signaling

• DOI: 10.1038/onc.2009.506
• 发表时间: 2010-04-01
• 期刊: ONCOGENE
• 影响因子: 8
• 作者: Hagiwara, S.;Murakumo, Y.;Takahashi, M.
• 通讯作者: Takahashi, M.