ROCKシグナルを標的とした犬悪性黒色腫の新規治療法の探索

寻找针对ROCK信号的犬恶性黑色素瘤新治疗方法

• 批准号: 21K20614
• 负责人: 高橋 洋介
• 金额: $ 2万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-08-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K20614/
• 关键词: 犬; 悪性黒色腫; 転移; 悪性腫瘍; ROCK; 腫瘍; ポドプラニン; Rho kinase; 分子標的薬; Rho-associated kinase

本研究では、申請者が同定した犬悪性黒色腫の新規治療標的である「PDPN-ROCKシグナル」の阻害による新たな全身療法の確立を目指した前臨床研究を行う。本年度は、PDPNをCRISPR/Cas9法にて欠損させた犬悪性黒色腫細胞株2株(ノックアウト株)および親株のmRNAシークエンスを実施し、PDPN-ROCKシグナルに起因する遺伝子発現変動を検証した。その結果、昨年度のin vitro assayにて明らかになった移動、浸潤、増殖に関連した遺伝子変動を認め、in vitro assayとの結果の一致を確認した。さらに、間葉-アメーバ転換に関連する遺伝子の発現変動を認めた。そこで、PDPN-ROCKシグナルと間葉-アメーバ転換の関連について、in vitro assayにて追加の評価を行なった。その結果、ノックアウト株では細胞形態の球体化指数の低下や細胞質突起の消失などを認め、アメーバ様の形態を示す親株に比べ間葉様の形態へと変化していた。つまり、PDPN-ROCKシグナルは犬悪性黒色腫において間葉-アメーバ転換を促進し、アメーバ様細胞による浸潤転移を促進していることが示唆された。また、ROCK阻害剤のin vitro添加によりノックアウト細胞株で観察された現象を再現できることもわかった。さらに、犬および人の粘膜由来悪性黒色腫症例検体のmRNAシークエンス公共データを用いて、PDPN-ROCKシグナルと間葉-アメーバ転換に関連した遺伝子群の発現変動を解析した。その結果、犬悪性黒色腫症例検体mRNAシークエンスデータにおいても、細胞株を用いた検証と同様に、PDPN-ROCKシグナルによる間葉-アメーバ転換の誘導を示唆するデータが得られた。これらの機序は人の粘膜型悪性黒色腫にも共通して見出された。

This study aims to establish a new treatment target for canine melanoma, PDPN-ROCK, and establish a new systemic therapy for canine melanoma. This year, PDPN CRISPR/Cas9 method was used to detect the mRNA expression of 2 canine melanoma cell lines (CRISPR/Cas9 strain) and their parents. PDPN-ROCK detection was performed to detect the gene expression of CRISPR/Cas9 cells. The consistency of the results of the in vitro assay and the results of the in vitro assay was confirmed. In addition, the development of the gene is recognized by the inter-leaf-loss and inter-leaf-loss. PDPN-ROCK is the most important factor in determining the relationship between PDPN-ROCK and VTR. As a result, the spheroidization index of cell morphology decreased and cytoplasmic processes disappeared. The morphology of cell morphology decreased compared with that of parent plants. The PDPN-ROCK system promotes cell infiltration and cell migration. ROCK inhibitors are added in vitro and the phenomenon is observed in cell lines. The expression of mRNA in mucosa-derived melanoma in dogs and humans was analyzed by using PDPN-ROCK. The results showed that the expression of mRNA in canine melanoma and the expression of PDPN-ROCK in cell lines were similar. The mechanism of this disease is common to all types of mucous membrane black tumors.

项目成果

Podoplanin promotes the tumor growth of canine malignant melanoma via Rho-associated kinase signals

Podoplanin 通过 Rho 相关激酶信号促进犬恶性黑色素瘤的肿瘤生长

• 发表时间: 2021
• 作者: Masahiro Shinada;Daiki Kato;Namiko Ikeda;Toshio Li;Yuka Kodera;Masaya Tsuboi;James Chambers;Kazuyuki Uchida;Yukinari Kato;Ryohei Nishimura;Takayuki Nakagawa.
• 通讯作者: Takayuki Nakagawa.

イヌ悪性黒色腫のPDPN-ROCKシグナルを標的とした新たな分子標的治療の検証

针对犬恶性黑色素瘤的 PDPN-ROCK 信号新分子靶向治疗的验证

• 发表时间: 2022
• 作者: 品田真央;加藤大貴;池田凡子;李捷生;小寺優佳;青木督;太田崚介;高橋洋介;橋本裕子;坪井誠也;チェンバーズジェームズ;内田和幸;加藤幸成;西村亮平;中川貴之.
• 通讯作者: 中川貴之.

犬悪性黒色腫に対する抗ポドプラニン抗体を用いた分子標的治療の開発

抗平足蛋白抗体分子靶向治疗犬恶性黑色素瘤的进展

• 发表时间: 2022
• 作者: 嘉本諭;加藤大貴;品田真央;坪井誠也;池田凡子;青木督;小寺優佳;李捷生;太田崚介;高橋洋介;橋本裕子;チェンバーズジェームズ;内田和幸;金子美華;西村亮平;加藤幸成;中川貴之
• 通讯作者: 中川貴之