緑藻クラミドモナスにおけるアグロバクテリウムを用いた遺伝子破壊系の確立

利用农杆菌在绿藻衣藻中建立基因破坏系统

• 批准号: 24870016
• 负责人: 梶川 昌孝
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-08-31 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24870016/
• 关键词: 形質転換; 外来遺伝子導入; 微細藻類; クラミドモナス; アグロバクテリウム

クラミドモナスに対する高感染性アグロバクテリウム株の選定と形質転換条件の最適化クラミドモナス細胞核中の染色体DNAにT-DNAが安定に組み込まれる条件をつきとめるため、以下の諸条件を組み合わせてアグロバクテリウム感染の最適化を試みた。a, 高感染性アグロバクテリウム菌株の選定　単子葉植物や酵母などアグロバクテリウムの宿主範囲外生物の形質転換で使用されている高感染性（supervirulent）菌株を用いて、安定形質転換体が取得できるかを調べ、最も頻度が高く薬剤耐性能を示す菌株を絞り込んだ。b, 感染に最適なクラミドモナス株と細胞ステージの決定　クラミドモナスには細胞壁が厚い系統と薄い系統が存在する。細胞壁の厚さが感染効率に影響するかを細胞壁の厚さの異なる3種類の系統（C9、5D、cw-15）を用いて検証した。しかし、細胞壁の有無は薬剤耐性個体の出現頻度に影響を及ぼさなかった。c, 適切な選抜マーカー遺伝子とアグロバクテリウムの除菌薬剤の選定　クラミドモナスの従来法による形質転換体選抜にはaph7’遺伝子（ハイグロマイシン選抜）、aphVIII 遺伝子（パラモマイシン選抜）、ble遺伝子（ゼオシン選抜）などの選抜システムが使用されている。これらの薬剤選抜系の中でアグロバクテリウム法に適したものを調べるため、各遺伝子発現カセットを既にバイナリーベクターpCAMBIA-1300に組み込み、感染実験に用いた。また、感染後のアグロバクテリウム菌体の除菌に、meropenemやmoxalactamといった新規eta-lactam系抗生物質がクラミドモナスでも効果的であることが示された。

Optimization of the selection and transformation conditions of highly infectious strains in response to chromosome DNA and T-DNA stability in the nucleus of the cells. Optimization of the infection conditions of highly infectious strains by combining the following conditions. a. Selected cotyledon plant yeasts of highly infectious strains, including yeast, host species, host species, and host species, are used in the production of highly infectious (supervirulent) strains. b. The optimal cell wall thickness system and cell wall thickness system for infection. Three different cell wall thickness systems (C9, 5D, CW-15) were used to demonstrate the effect of cell wall thickness on infection rate. The presence or absence of cell wall resistance affects the frequency of occurrence of resistant individuals. c. Select the appropriate candidate for the selection of the sterilizing agent for the selection of the candidate. In this case, the drug selection system is in the middle of the drug selection process, and each drug discovery process is in the middle of the drug selection process. The new eta-lactam is an antibiotic substance that can be used to sterilize bacteria, meropenem and moxalactam after infection.

项目成果

分子育種によるスクアレンを高蓄積するクラミドモナス形質転換体の作出

通过分子育种创建高积累角鲨烯的衣藻转化体

• 发表时间: 2013
• 作者: T. Shiota;M. Maruyama;M. Miura;Y. Tamura;K. Yamano;M. Esaki;and T. Endo;田村 康;Makiko Kobayashi;Yamashino Takahumi;Yamashino Takahumi;Ito Shogo;Kumiko Samejima;Laura Wood;鮫島久美子;本田信治;高鳥直士，熊野岳，西駕秀俊，西田宏記;福澤秀哉;河野恵子;梶川昌孝;高鳥直士，西駕秀俊，西田宏記．;河野恵子;梶川昌孝
• 通讯作者: 梶川昌孝

緑藻クラミドモナスにおける無機炭素濃縮機構と脂質代謝

绿藻衣藻无机碳富集机制及脂质代谢

• 发表时间: 2012
• 期刊: 光合成研究
• 作者: T. Shiota;M. Maruyama;M. Miura;Y. Tamura;K. Yamano;M. Esaki;and T. Endo;田村 康;Makiko Kobayashi;Yamashino Takahumi;Yamashino Takahumi;Ito Shogo;Kumiko Samejima;Laura Wood;鮫島久美子;本田信治;高鳥直士，熊野岳，西駕秀俊，西田宏記;福澤秀哉
• 通讯作者: 福澤秀哉

FACSを用いたクラミドモナスの脂質蓄積異常変異株の単離と変異原因遺伝子の解析

使用 FACS 分离脂质积累异常的衣藻突变株并分析突变基因

• 发表时间: 2013
• 作者: T. Shiota;M. Maruyama;M. Miura;Y. Tamura;K. Yamano;M. Esaki;and T. Endo;田村 康;Makiko Kobayashi;Yamashino Takahumi;Yamashino Takahumi;Ito Shogo;Kumiko Samejima;Laura Wood;鮫島久美子;本田信治;高鳥直士，熊野岳，西駕秀俊，西田宏記;福澤秀哉;河野恵子;梶川昌孝
• 通讯作者: 梶川昌孝

テルペノイド生合成の初発酵素DXSを過剰発現する緑藻の作出と代謝特性の解析

过表达萜类生物合成主要酶 DXS 的绿藻的创建及代谢特征分析

• 发表时间: 2013
• 作者: T. Shiota;M. Maruyama;M. Miura;Y. Tamura;K. Yamano;M. Esaki;and T. Endo;田村 康;Makiko Kobayashi;Yamashino Takahumi;Yamashino Takahumi;Ito Shogo;Kumiko Samejima;Laura Wood;鮫島久美子;本田信治;高鳥直士，熊野岳，西駕秀俊，西田宏記;福澤秀哉;河野恵子;梶川昌孝;高鳥直士，西駕秀俊，西田宏記．;河野恵子;梶川昌孝;折井みなみ （博士課程学生）;下山未希
• 通讯作者: 下山未希