腸肝循環を担う新規ヒト有機アニオントランスポーター遺伝子の構造と機能の解明

阐明负责肠肝循环的新型人类有机阴离子转运蛋白基因的结构和功能

• 批准号: 14370371
• 负责人: 鈴木 正徳
• 金额: $ 7.1万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14370371/
• 关键词: 腸管上皮細胞; 有機アニオントランスポーター; OATP-E; 胆汁酸; 甲状腺ホルモン; 蛍光免疫染色; 腸肝循環

1)ヒト小腸上皮cDNAライブラリーの作製ヒト小腸、特に回盲部腸管上皮を手術標本より採取し、poly A RNAを抽出し、逆転写酵素を用いてcDNAを作製し、lambda ZAPIIベクターに組み込んだ、ヒト小腸上皮DNAライブラリーを作製した。現在ライブラリーを既知のcDNA、ヒトLST-1,LST-2をプローブとしてスクリーニングを行なっている途中である。ヒト腸管上皮の基底膜側にはOATP-Eが発現していることが明らかとなったが(後述)、apical側のナトリウム非依存性トランスポーターはいまだ不明であり、この新規トランスポーターの単離を継続する予定である。2)ヒトOATP-Eの小腸における発現ヒトOATP-Eは我々が単離した、胆汁酸・甲状腺ホルモンを輸送する新規有機アニオントランスポーターである。このOATP-Eは様々な臓器で発現していることが知られていたが、腸管の上皮細胞での発現はこれまで明らかにされていなかった。我々はこのOATP-Eに対する抗体を作製しウエスタンブロット、免疫染色を行なった。ウエスタンブロットでは約55kDaの単一バンドとして腸管上皮での発現が確認された。また免疫組織化学法を施行し消化管上皮での細胞内局在を検討したところ、回腸末端粘膜上皮細胞の基底膜上に強い発現が見られた。極性をもつヒト大腸癌由来細胞株Caco-2を用いて同様に免疫組織学的検討を行うと、細胞膜にOATP-Eの発現が見られ、CD13とは共存しないことよりapical側ではなくbasolateral側に局在すると考えられた。以上の結果よりOATP-Eは腸管上皮細胞の基底膜側に局在し、apical側のトランスポーターにより細胞内に輸送された胆汁酸や甲状腺ホルモンを基底膜側から細胞外へと輸送する機能を有していると考えられ、胆汁酸や甲状腺ホルモンの腸肝循環に関与するトランスポーターであることが明らかとなった。

1) Production of small intestinal epithelial cDNA: Surgical treatment of small intestinal epithelium, especially ileocecal intestinal epithelium, including sampling, extraction of poly A RNA, use of reverse transcription enzymes to produce cDNA, lambda ZAPII beekta component, and production of small intestinal epithelial DNA. Now, the cDNA, LST-1 and LST-2 are known to be in the process of transformation. OATP-E appears on the basement membrane side of the gut epithelium (described later), and on the apical side (described later), independent of the gut epithelium). 2) OATP-E small intestine development OATP-E small intestine development OATP-E small intestine development The OATP-E gene is found in the epithelial cells of the intestine. I'm going to make an OATP-E antibody. It was confirmed that the protein was about 55 kDa in size. Immunohistochemical method was used to investigate the intracellular structure of the epithelium of the digestive tract and the basement membrane of the epithelial cells of the terminal ileum. The expression of OATP-E in cell membrane was observed in Caco-2, CD13 and CD14, and the expression of CD13 in apical side was detected in basal side. These results indicate that OATP-E has the function of intracellular bile acid and thyroid transport on the basal membrane side of intestinal epithelial cells and extracellular bile acid and thyroid transport on the basal membrane side of intestinal epithelial cells.