肺癌発生におけるDNAメチルトランスフェラーゼの基礎的・臨床的意義

DNA甲基转移酶在肺癌发生发展中的基础和临床意义

• 批准号: 16390237
• 负责人: 山口 佳寿博
• 金额: $ 7.36万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16390237/
• 关键词: 肺癌; DNAメチルトランスフェラーゼ

1)両親の異なる2種類の、SV40ラージT抗原および活性化rasを導入されたDnmt3b^<-/->および対の野生型のMEFに、レトロウィルスベクターであるpBabe/bleomycin単独、あるいはDnmt3^<-/-> MEFに対してはマウスDnmt3b1、3b2あるいは3b3を組み込んだものを同時に細胞に感染させ、phleomycinを用いて選定することにより、各spliced formのDnmt3bを有するMEFを作成した。これらのMEFを用いて、通常培養プレート上での細胞増殖、および0.3%ソフトアガロース内でコロニー形成能、さらにヌードマウスでの腫瘍形成能を比較検討する予定であったが、今後の検討課題として残った。2)癌化させたNHBE細胞に対して、各spliced formの役割を個別に評価するために、各spliced formにだけ含まれるsequenceに対する2本鎖のRNAオリゴヌクレオチドを用いて、RNA interference (RNAi)の原理により、すべてのDNMT3b、DNMT3b1/3b2のみ、あるいはDNMT3b3のみを特異的にノックアウトした。特異的にノックアウトされたかどうかを各spliced formにだけ含まれるsequenceから設計したプライマー・プローブを用いて、定量的PCRにより確認した。これらの細胞を用いて、0.3%ソフトアガロース内でコロニー形成能を比較検討することにより、DNMT3bに対する阻害剤のスクリーニングを行う上で、いずれのspliced formに対してスクリーニングを行えばよいか明らかにする予定であったが、今後の検討課題として残った。3)ヒトDNMT3b1および3b3を組み込んだバキュロウィルスベクターを用いてヒトDNMT3b1および3b3タンパクを精製し、いずれにもde novoメチルトランスフェラーゼ活性があることを確認した。今回、研究代表者の転勤により、本研究は交付後薬約3ヶ月で計画を廃止することになったため、本研究においては研究の目的を達することができなくなった。上記の検討は今後の研究を推進するための基礎研究であった。

1) struck close の different な る type 2 の, SV40 ラ ー ジ T antigen お よ び activeness ras を import さ れ た Dnmt3b ^ < - / - > お よ び の seaborne wild-type の MEF に, レ ト ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー で あ る pBabe/bleomycin 単 alone, あ る い は Dnmt3 ^ < - / - > MEF に し seaborne て は マ ウ ス Dnmt3b1, 3 b2 あ る い は 3 b3 を み 込 ん だ も の を に cells at the same time に infection さ せ, phleomycin を with い て selected す る こ と に よ り and spliced form の Dnmt3b を have す る MEF を made し た. こ れ ら の MEF を with い て, usually develop プ レ ー ト on で の cells raised colonization, お よ び 0.3% ソ フ ト ア ガ ロ ー ス within で コ ロ ニ ー formation energy, さ ら に ヌ ー ド マ ウ ス で の swollen sores can form を compare beg す 検 る designated で あ っ た が, future の 検 for subject と し て residual っ た. 2) cancer さ せ た NHBE cells に し seaborne て and spliced form cut を individual に の service evaluation 価 す る た め に and spliced form に だ け containing ま れ る sequence に す seaborne る 2 this lock の RNA オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を with い て, RNA interference (RNAi) の principle に よ り, す べ て の DNMT3b, DNMT3b1/3 b2 の み, あ る い は DNMT3b3 の み を specific に ノ ッ ク ア ウ ト し た. Specific に ノ ッ ク ア ウ ト さ れ た か ど う か を the spliced form に だ け containing ま れ る sequence か ら design し た プ ラ イ マ ー · プ ロ ー ブ を with い て, quantitative PCR に よ り confirm し た. こ れ ら の cells を using い て, 0.3% ソ フ ト ア ガ ロ ー ス within で コ ロ ニ ー formation can beg す を compare 検 る こ と に よ り, DNMT3b に す seaborne る resistance against tonic の ス ク リ ー ニ ン グ を line う で, い ず れ の spliced Form に し seaborne て ス ク リ ー ニ ン グ を line え ば よ い か ら Ming か に す る designated で あ っ た が, future の 検 for subject と し て residual っ た. 3) ヒ ト DNMT3b1 お よ び 3 b3 を み 込 ん だ バ キ ュ ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー を with い て ヒ ト DNMT3b1 お よ び 3 b3 タ ン パ ク を refined し, い ず れ に も DE novo メ チ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ active が あ る こ と を confirm し た. Now back to the representatives, research の planning frequently に よ り, this study は で 薬 about 3 ヶ month after delivery plan を 廃 check す る こ と に な っ た た め, this study に お い て purpose の は study を da す る こ と が で き な く な っ た. The above note states that 検 検 discusses 検, and in the future, を research を advances するため <s:1> basic research であった.