tRNA dynamics between the nucleus and the cytoplasm
细胞核和细胞质之间的 tRNA 动力学
基本信息
- 批准号:14580694
- 负责人:
- 金额:$ 2.24万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2002
- 资助国家:日本
- 起止时间:2002 至 2003
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
The aim of this project is to clarify the intracellular localization of tRNA ligase, Rlg1p, and describe nuclear-cytoplasmic dynamics of tRNAs during their maturation. In the term of the research, I focused on the two major points listed above using yeast Saccharomyces cerevisiae, and also started development of the in vitro system to analyze intracellular dynamics of tRNAs.1) I found that Rlg1p is mainly localized in the cytosol not in the nucleus, using immuno-cytochemical techniques and cell fractionation techniques with specific antibodies against Rlg1p and with tag-fused Rlg1p. I could not find any nuclear localization signal in Rlg1p through the analysis of Rlg1p partial deletions. On the other hand Rlg1p with a mitochondrial anchor signal could substitute the authentic Rlg1p, indicating that Rlg1p stays and functions in the cytoplasm.2) I developed a system to trace a particular tRNA molecule with ^3H-uracil pulse-labeling and hybrid-precipitation techniques. Using the system, I found that pre-tRNAs accumulated in the cytosol of the temperature-sensitive tRNA splicing mutant are not dead-end products but can be chased into mature tRNAs. The results indicate that tRNA splicing occurs not in the nucleus but in the cytosol.3) Using art expression system of S.pombe tRNA in S.cerevisiae cells and heterokaryon assay utilizing yeast mating procedures, I demonstrated that mature tRNA is re-imported into the nucleus for the first time.These results force us to change our image of uni-directional movement, from the nucleus to the cytoplasm, of tRNAs during their maturation.
该项目的目的是阐明 tRNA 连接酶 Rlg1p 的细胞内定位,并描述 tRNA 在成熟过程中的核细胞质动力学。在研究期间,我利用酿酒酵母重点研究了上述两个要点,并开始开发体外系统来分析 tRNA 的细胞内动态。 1)我发现 Rlg1p 主要定位在细胞质中而不是细胞核中,使用免疫细胞化学技术和针对 Rlg1p 的特异性抗体的细胞分级分离技术 以及标签融合的 Rlg1p。通过对Rlg1p部分缺失的分析,没有发现Rlg1p中有任何核定位信号。另一方面,带有线粒体锚定信号的 Rlg1p 可以替代真正的 Rlg1p,表明 Rlg1p 在细胞质中停留并发挥作用。2) 我开发了一个系统,利用 ^3H-尿嘧啶脉冲标记和混合沉淀技术来追踪特定的 tRNA 分子。使用该系统,我发现在温度敏感的 tRNA 剪接突变体的细胞质中积累的前 tRNA 不是死端产物,而是可以被追逐成成熟的 tRNA。结果表明,tRNA 剪接不是发生在细胞核中,而是发生在细胞质中。3)利用酿酒酵母细胞中的 S.pombe tRNA 艺术表达系统和利用酵母交配程序的异核分析,我首次证明了成熟的 tRNA 被重新导入细胞核中。这些结果迫使我们改变从细胞核到细胞单向运动的形象。 tRNA 在成熟过程中的细胞质。
项目成果
期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
T.Yoshihisa et al.: "Possibility of Cytoplasmic pre-tRNA Splicing : the Yeast tRNA Splicing Endonuclease Mainly Localizes on the Mitochondria"Mol.Biol.Cell. 14. 3266-3279 (2003)
T.Yoshihisa 等人:“细胞质前 tRNA 剪接的可能性:酵母 tRNA 剪接核酸内切酶主要定位于线粒体”Mol.Biol.Cell。
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- 作者:
- 通讯作者:
T.Endo et al.: "Protein Flux into Mitochondria"Jikken Igaku. 21. 1889-1895 (2003)
T.Endo 等人:“蛋白质流入线粒体”Jikken Igaku。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
遠藤斗志也 他: "ミトコンドリアをめぐるタンパク質フラックス"実験医学(増刊号「細胞内輸送-研究の最前線」). 21. 1889-1895 (2003)
Toshiya Endo 等人:“线粒体周围的蛋白质通量”实验医学(特刊“细胞内运输 - 研究前沿”)。1889-1895 年 21 月(2003 年)。
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