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インテグリンによる細胞相互作用の可塑性と堅牢性の生成メカニズムと生体機能の解明

阐明整合素产生细胞相互作用的可塑性和鲁棒性的机制及其生物学功能

基本信息

批准号：
22H02623
负责人：
木梨達雄
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02623/
关键词：
cell adhesion integrins Rap1 talin kindlin3 細胞接着インテグリン

项目摘要

（１）インテグリンを調節する分子間の細胞内結合動態と接着誘導の解明：細胞外LFA1と細胞内α4β1, α4β7, αIIbβ3 のキメラ分子を作成・BAF細胞に導入後、結合過程の一分子イメージングによる結合動態解析を行った。高親和性細胞外LFA1をmAb24で誘導し細胞内領域（CT）をβ2からβ1,β7に置換したキメラ分子とtalin1との結合はβ7がもっとも弱く、β2がもっとも強いことが明らかになった。（２）ローリング、一過性停止(tether)、安定した停止(arrest)の動態変化をする実験系を用いて、遺伝子欠損T細胞の解析からtalin1、kindlin3、Rap1a/Rap1b、Rap1活性化因子 (RasGRP2, C3G)がCCL21による停止に必須であった。Rap1 affinity probe, halotag-talin1 knock-inマウス由来T細胞を用い、潅流下のキャプチャーからRap1が活性化し、遺伝子欠損T細胞の解析から, ローリングの安定化（速度低下）にはRap1、talin1が必要であるが、kindlin-3は必要ないこと、停止接着にはRap1, talin1, kindlin-3が必要であることが明らかになった。（３）細胞極性および細胞接着・移動の制御過程を明らかにする。前年度の解析結果から接着非依存性のCCL21によるT細胞の細胞極性をimaging cytometryおよびAIによる数万の画像解析の自動化によってRap1依存性を同定した。さらにRap1はDOCK2/Racによるアクチン骨格の成長(pseudopod)に依存してC3G/RasGRP2が活性しRap1の活性化を誘導することが明らかになった。

(1) The understanding of intracellular binding dynamics and subsequent induction between molecules regulated by gene expression: extracellular LFA1 and intracellular α4β1, α4β7, αIIbβ3 molecules were produced. BAF cells were introduced into BAF cells, and the binding dynamics of a molecule in the binding process were analyzed. High affinity extracellular LFA1 mAb24 induced intracellular domain (CT) β2,β7, substitution, talin1, binding, β7, weak, β2, strong. (2) Dynamic changes in transition, tether, and arrest are required for the analysis of defective T cells by thalin 1, kindlin3, Rap1a/Rap1b, Rap1 activation factors (RasGRP2, C3G), and CCL21. Rap1 affinity probe, halotag-talin1 knock-in Originated from T cell activation, halotag-talin1 knock-in Originated from T cell activation, halotag-talin 1 knock-in Originated from T cell activation, halotag-talin 1 knock-in Originated from T cell activation, halotag-talin 1 knock-in Originated from T cell inactivation, halotag-talin 1 knock-in Originated from T cell activation, halotag-talin 1 knock-in Originated from T cell inactivation, halotag-talin 1 knock-in Originated from T cell inactivation, halotag-talin 1 knock-in Originated from T cell inactivation, halotag-talin 1 knock-in 1 knock-in Originated from T cell inactivation, halotag-talin 1 knock-in 1 knock-in Originated from T cell inactivation, halotag-talin 1 knock-in Originated from T cell inactivation, halotag-talin 1 knock-in 1 knock (3) Cell polarity and cell movement control process. The analysis results of the previous year were not dependent on CCL21. The cell polarity of T cells was determined by imaging cytometry and AI. The automatic analysis of images was determined by Rap1. In addition, Rap1 is dependent on C3G/RasGRP2 activity and Rap1 activity induction.