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RAPLによるリンパ球極性誘導機構を解明するシステムの樹立

RAPL阐明淋巴细胞极性诱导机制的体系建立

基本信息

批准号：
16657058
负责人：
木梨達雄
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657058/
关键词：
インテグリン Rap1 RAPL 細胞極性リンパ球

项目摘要

低分子量Gタンパク質Rap1とそのエフェクター分子RAPLはTCRやケモカインによるLFA-1、VLA-4の接着性亢進を伝達するinside-outシグナルである。Rap1-RAPLにインテグリン接着上昇の機序は細胞極性誘導と連関してインテグリンを細胞先端極に集積させることによることを明らかにしてきた。この機序をさらに明らかにするために可視化技術を用いて解析する系を樹立することを試みた。樹状細胞は特徴的な樹状突起や大きな細胞質もち、可視化技術による観察に適しており、しかもリンパ球と同様、Rap1-RAPLによる高い動態能力を持つ細胞である。そこでまず樹状細胞を用いてRap1-RAPLの細胞内局在変化をとらえる系を樹立した。Rap1の活性化型であるRap-1GTPに特異的に結合するRalGDS由来のRap1-binding domainにGFPを融合させたGFP-RalGDS-RBD蛋白質を作成した。またGFPに融合させたRAPLを作成した。また細胞極性誘導におけるRap1の必要性を調べるため、Rap1を特異的に不活化するSpa1や優性活性化型Rap1V12をレトロウイルスで導入する系を作製した。これらを骨髄由来樹状細胞に導入し、ケモカインCCL21刺激による細胞極性形成はRap1-RAPLに依存して一極にラッフル膜を形成し、そこにRap1-GTPやRAPLが移行する。またLFA-1,VLA-4も同じ部位に集積した。現在、微小管、アクチン線維、小胞マーカーを用いてこれらとの関係を解析している。

Low molecular weight GタンパクRAP1とそのエフェクターmolecule RAPLはTCRやケモカインによThe subsequent hyperactivity of LFA-1 and VLA-4 is the result of hyperactivity inside-out. Rap1-RAPL is the mechanism of subsequent rise and is related to the induction of cell polarity.インテグリンをThe cell apex is extremely concentrated.この机码をさらに明らかにするためにVisualization technology を Use いて analysis する system をEstablishment することをtrial みた. Dendritic cells have unique dendritic processes, large cytoplasm, and visualization technology. , しかもリンパ球と同様, Rap1-RAPL による高いDYNAMIC CAPABILITY をhold つ cells である. The dendritic cells were established using the intracellular localization of Rap1-RAPL. The activated form of Rap1, Rap-1GTP, is a specific binding protein derived from RalGDS, which is a fusion of Rap1-binding domain and GFP-RalGDS-RBD protein. It is a fusion of GFP and RAPL. The necessity of inducing cell polarity and the specific inactivation of Rap1するSpa1's excellent activated type Rap1V12 をレトロウイルスで is imported from する series をproduced by した. Introducing dendritic cells from これらをbone marrow, ケモカインCCL21 stimulates によるcell polarity formationはRap1- RAPL's dependence is the formation of one pole's membrane, and the migration of RAPL's Rap1-GTP. The LFA-1 and VLA-4 are the same as the ones that are concentrated in the same parts. Now, the microtubule, the アクチン line dimension, and the small cell マーカーを are analyzed using いてこれらとのrelations.