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疾患基盤となるサルコメアとミトコンドリア相互制御機構の解明

阐明作为疾病基础的肌节和线粒体之间的相互控制机制

基本信息

批准号：
22H03073
负责人：
魚崎英毅
金额：
$ 10.98万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03073/
关键词：
心筋細胞サルコメアミトコンドリア成熟

项目摘要

本研究課題では心筋細胞の成熟過程におけるサルコメアとミトコンドリアの相互作用について研究を行っている。初年度である2022年度はまず成熟過程におけるサルコメアの収縮およびカルシウムイオン動態について検討を行った。1. 我々が有する成熟レポーターであるMyom2-RFP ノックインマウスES細胞由来心筋細胞に対し、サルコメアの収縮を阻害し、Myom2-RFPの発現を評価した。心筋細胞の収縮を完全には抑制しない、低濃度の阻害剤処理であっても、Myom2-RFP陽性率が低下し、サルコメアの収縮そのものが心筋細胞の成熟に影響を与えていると予想された。サルコメアの収縮は主に細胞内カルシウムイオン濃度の増加により制御されるため、種々のカルシウムイオンチャネルブロッカーを用いたところやはりMyom2-RFP陽性率が低下した。今後、ミトコンドリア形態やその活性評価につなげる予定である。2. サルコメアの整列とミトコンドリアの整列を評価するために、ライブイメージングを行うことを計画した。様々なタンパクについて容易にライブイメージングを可能とするため、サルコメアおよびミトコンドリアに局在するタンパクにGFPないしRFPを付加した融合タンパク質を設計し、分化心筋細胞で発現できるよう心筋特異的プロモーター下に発現させるアデノ随伴ウイルスベクターを作成した。サルコメアに局在するTNNT2, TPM1, TNNI3, ACTN2, ACTC2などは予想通りの局在が観察された。一方で、ミトコンドリア局在シグナルを付加したGFPはミトコンドリアに局在せず、ミトコンドリア機能に影響を与えない融合タンパク質発現ベクターの設計と検証を進めている。

This research topic is about the study of the maturation process of cardiac muscle cells. In the first year of 2022, the maturity process of the company was discussed. 1. Myom 2-RFP is a mature cell derived from the heart. The contraction of cardiac muscle cells was completely inhibited, and the positive rate of Myom2-RFP was decreased after treatment with low concentration of inhibitors. The positive rate of Myom2-RFP was lower than that of the control group. In the future, the activity evaluation of the drug will be determined. 2. The whole column of the column is divided into three parts. In addition to the RFP, the fusion protein is designed to differentiate into cardiac muscle cells, and the development of cardiac muscle cells is possible under the condition that it is not specific to the cardiac muscle. TNNT2, TPM1, TNNI3, ACTN2, ACTC2, etc. In addition, the GFP has been added to the design of the system, and the system has been integrated into the design of the system.