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血管壁細胞ホスホリパ-ゼA_2の多様性と調節機構の解析

血管壁细胞磷脂酶A_2多样性及调控机制分析

基本信息

批准号：
03268209
负责人：
工藤一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

血管壁細胞のうち血管内皮細胞に注目し、そのホスホリパ-ゼA_2の性状と活性調節機構、及び生理現象への関わりを明らかにすることを目的とした。1)ヒト培養血管内皮細胞(HUVEC)のホスホリパ-ゼA_2活性の検出とその同定:HUVECライゼ-トを酵素源としてホスホリパ-ゼA_2活性を測定したところ、比較的弱いながらアラキドン酸含有リン脂質を選択的に加水分解する酵素活性が検出された。本酵素活性は、抗ウサギ血小板85‐kDa細胞質ホスホリパ-ゼA_2特異抗体により効率よく吸収された。しかし、抗14‐kDaグル-プII型ホスホリパ-ゼA_2特異抗体とは全く反応しなかった。2)細胞外グル-プII型ホスホリパ-ゼA_2のHUVECのPGI_2産生への効果:血液凝固時あるいは全身性炎症時いずれの場合も、血管内皮細胞は高濃度のII型ホスホリパ-ゼA_2に晒されて、細胞のアラキドン酸代謝への影響を受けることが予想された。そこで、HUVECについて、(1)未刺激の細胞、(2)トロンビン処理した細胞、(3)TNF処理した細胞をそれぞれ用いて、細胞外II型ホスホリパ-ゼA_2のPGI_2産生への効果を検討した。その結果、(1)酵素単独で処理した細胞は、酵素を添加していない細胞の約2倍のPGI_2を産生し、(2)トロンビン(2U/ml)存在下、細胞を10分間酵素処理したところ、相加的なPGI_2産生の亢進が観察された。更に、(3)ヒトリコンビナントTNFα(1,000U/ml)存在下酵素処理したところ、TNF単独あるいは酵素単独で添加した細胞と比べて著しく高い、相乗的なPGI_2産生が観察された。以上より、ヒト血管内皮細胞でPGI_2産生に供されるアラキドン酸は、85‐kDa細胞質ホスホリパ-ゼA_2と細胞外II型ホスホリパ-ゼA_2によって産生されると予想された。後者は、他の刺激物質と協調して、血管内皮細胞のアラキドン酸代謝を調節しているものと考えられた。

Vascular endothelial cells are characterized by their ability to regulate the activity of vascular endothelial cells, and by their ability to regulate physiological phenomena. 1) Determination of the activity of A2 in cultured HUVEC: Determination of the activity of A2 in HUVEC: Determination of the activity of A2 in HUVEC: Determination of the activity of A2 in HUVEC: Determination of the activity of A2 in HUVEC. The enzyme activity was detected by anti-platelet 85-kDa cytosol and anti-A2 antibody. Anti-A2 antibodies are anti-A2 antibodies. 2)The effects of extracellular type II cytokinases on PGI_2 production in HUVECs: blood coagulation, systemic inflammation, high concentration of type II cytokinases in vascular endothelial cells, and effects of cellular acid metabolism are expected. This paper discusses the effects of HUVEC stimulation,(1) unstimulated cells,(2) TNF-treated cells,(3) TNF-treated cells, extracellular type II cells, and PGI_2 production. The results showed that (1) the PGI_2 production of cells treated with enzyme alone was about 2 times higher than that of cells treated with enzyme alone, and (2) the PGI_2 production of cells treated with enzyme alone was about 10 times higher than that of cells treated with enzyme alone in the presence of enzyme alone (2U/ml). Furthermore,(3) in the presence of TNFα(1,000U/ml), the production of PGI_2 was observed in cells treated with TNF α alone. The above results indicate that PGI_2 production in vascular endothelial cells is mainly due to the 85-kDa cytosol and extracellular type II cytosol. The latter is related to the coordination of other stimulants and the regulation of acid metabolism in vascular endothelial cells.