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血小板に存在するアラキドン酸高親和性ホスホリパーゼA_2の生化学的解析

血小板中花生四烯酸高亲和力磷脂酶 A_2 的生化分析

基本信息

批准号：
04680154
负责人：
工藤一郎
金额：
$ 1.02万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680154/
关键词：
血小板ホスホリパーゼA_2 リゾホスホリパーゼ臨界シセル濃度

项目摘要

刺激にともなった細胞のアラキドン酸代謝物産生反応過程の律速と予想されるホスホリパーゼA_2(PLA_2)を、ウサギ血小板細胞質から精製した。本酵素の分子量は約88,000であり、10^<-6>M以下のCa^<2十>濃度で充分に活性を発現し、アラキドン酸含有リン脂質をリノール酸含有リン脂質よりよい基質とした。本研究では本PLA_2がリゾホスホリパーゼ活性を合わせ持つことを見いだし、以下の通り解析した。(1)本酵素のリゾホスホリパーゼ活性は、基質であるリゾホスファチジルコリン(リゾPC)の濃度が臨界ミセル濃度以上の時に観察された。従来より報告のあるリゾホスホリパーゼはいずれも単分子状態のリゾリン脂質も基質とし、特徴的であった。一方、本酵素の基質とはならないジアルキルPCからなる脂質二重層の中にリゾPCを平衡化させて反応させたところ、基質濃度がcmc以下でもリゾホスホリパーゼ活性は充分観察された。本酵素は脂質分子集合体中のリゾPCを基質とすると考えた。(2)本酵素のリゾホスホリパーゼ活性は特徴的な脂肪酸選択性を示した。即ち、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸からなるリゾPCをミセル状態で存在させた場合、切り出される脂肪酸はステアリン酸を1としたときパルミチン酸8、オレイン酸23であった。基質をジアルキルPCの脂質二重層中に平衡化させたと考えられる場合にも同様の脂肪酸選択性が観察された。本酵素は、リゾPCの脂肪酸鎖そのものを識別していると考えられた。(3)本酵素のPLA_2活性が10^<-7>Mから10^<-6>MのCa^<2十>濃度で活性化されるのに対し、リゾホスホリパーゼ活性はCa^<2十>非要求性であった。両活性に対する化学修飾剤または中和抗体の反応性の差から判断して、リゾホスホリパーゼ活性の活性中心はPLA_2活性の活性中心と異なる部位に存在すると予想している。両活性が生理的状態でどの様に制御され、発現しているのかを検討していくことが今後の課題である。

The regulation of the reaction process of acid metabolites produced by stimulating the growth of platelet cells was studied. The enzyme has a molecular weight of about 88,000 and <-6>a Ca <2 +> concentration of less than 10 μ M, and its activity is fully developed. In this study, PLA_2 activity was analyzed in detail. (1)The activity of the enzyme is monitored when the concentration of the enzyme is above the critical concentration. In addition to the above, it is also possible to use a variety of methods to describe the molecular state and characteristics of the lipid matrix. The activity of this enzyme is fully observed when the substrate concentration is less than cmc. This enzyme is a lipid molecule assembly in the form of a matrix. (2)The enzyme activity is characterized by fatty acid selectivity. That is, when the fatty acids are in the state of being separated, the fatty acids are separated from the fatty acids in the state of being separated, and the fatty acids are separated from the fatty acids in the state of being separated. In the case of matrix lipid, the same fatty acid selectivity was observed. This enzyme identifies the fatty acid chain of PC. (3)The PLA_2 activity of this enzyme ranges from 10^<-7>M to 10^<-6>M and the Ca^<2 +> concentration from 10 ^M to 10 ^M. The chemical modification of PLA_2 activity is expected to determine the difference in the reactivity of neutralizing antibodies. The physiological state of activity is controlled, developed, and discussed in the future.