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複製開始蛋白の機能ドメイン

复制起始蛋白的功能域

基本信息

批准号：
04254211
负责人：
伊藤建夫
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ColE2プラスミドの複製開始蛋白(Rep蛋白、35Kda)は、複製開始部位(Ori、約35塩基対)の二本鎖DNAに特異的に結合してプライマーRNAを合成する。今年度の研究により以下の知見が得られた。1.DNaseIおよびDMSを用いるフットプリント法により、Ori領域内に少なくとも二カ所のReo蛋白の結合部位(相互作用領域)が存在することが示された。一方はRep蛋白の特異的な結合に必要な最小領域(Ori領域の片側半分)内にあり、他方は、Ori領域の残りの部分のプライマーRNAの鋳型部位に隣接している。前者の領域は、Rep蛋白により覆われるような状態になっており、一方、後者の領域の内、前者に隣接するプライマーRNAの合成部位付近は弱く覆われ、最初のDNA鎖合成が始まる部分はほとんど覆われていないと推定される。後者の領域は、DNA合成酵素Iが相互作用しプラマーRNAを利用できるような状態になっているものと考えられる。2.Rep蛋白とOri領域の相互作用の特異性の異なる4グループについてアミノ酸配列・塩基配置を比較したところ、両者に少なくとも三カ所の相互作用に関与する部位(配列・残基)があることが示唆された。3.Ori領域外の二カ所の領域(約100塩基対と約200塩基対)に複製開始反応に対する促進(エンハンサー)機能が存在することが解った。シスに存在するOri領域の構造に影響を与えているものさ推定される。4.Rep蛋白とOri領域の結合をゲルシフト法で検出できることが解った。これを利用してRep蛋白とOri領域との認識・結合に関与するアミノ酸・塩基の位置を特定することが可能になるものと期待している。5.Rep蛋白のC未端側にDNA結合能があることが示唆されたので、C末端側ペプチドを用いてOri領域との相互作用を解析する可能性を検討している。

ColE2 protein replication initiation protein (Rep protein, 35Kda) binds specifically to the replication initiation site (Ori, about 35Kda) and to the two-lock DNA, and synthesizes RNA. This year's research has revealed the following findings. 1. The binding site of Reo protein (interaction domain) of DNase I and DMS is present in the domain of ORI. The specific binding of Rep protein in one side is necessary in the smallest domain (half of the slice of Ori domain), while the other side is adjacent to the RNA type in the residual part of Ori domain. The former domain, the Rep protein, the latter domain, the former adjacent to the RNA synthesis site, the first part of the DNA synthesis, the first part of the DNA synthesis, the first part of the DNA synthesis. The latter domain, DNA synthase I interaction, RNA utilization, DNA synthesis, DNA 2. The specificity of Rep protein interaction with Ori domain is different from that of other domains. 3. The domain of the second base station outside the Ori domain (about 100 base pairs to about 200 base pairs) is copied to the start of the reverse link. The promotion function exists. The structure of the Ori domain is presumed to be 4. Rep protein binding to Ori domain is a common problem. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with a person who's been in a relationship with a person. 5. To explore the possibility of DNA binding on the C-terminal side of Rep protein and its interaction with Ori domain.