複製開始蛋白の機能ドメイン

复制起始蛋白的功能域

• 批准号: 03259208
• 负责人: 伊藤 建夫
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03259208/
• 关键词: ColE2プラスミド; ColE3プラスミド; 複製開始蛋白; 複製開始部位; DNA結合蛋白; プラスミド特異性; キメラ遺伝子; キメラ蛋白

ColE2、ColE3プラスミドの複製開始蛋白(Rep蛋白、35Kda)は、複製開始部位(Ori部位、約35塩基対)にプラスミド特異的に作用して、DNA複製を開始させる。今年度の研究により以下の知見が得られた。1.キメラ遺伝子を作製することにより、Rep蛋白とOri部位との相互作用の特異性は、Rep蛋白C末端側約3分の1の領域内の2ヶ所の部分のアミノ酸配列の組合せとOri部位内の2ヶ所の位置の塩基の組合せとによって決定されていることが解った。2.Ori部位の欠失変異の性質の分子遺伝学的解析より、Ori部位は、Rep蛋白との相互作用とDNA複製開始反応の両方に必須の領域と後者のみに必須の領域とに分けられることが解った。3.Rep蛋白の再現性の高い精製法を確立できた。4.精製Rep蛋白を用いて、Ori部位への結合の様式をフィルタ-結合法とフット・プリント法により解析した。Ori部位内に少なくとも2ヶ所のRep蛋白との強い相互作用領域が存在すること、Rep蛋白の結合によりOri部位内および隣接領域にDNA構造の変化が誘起されること、などが解った。また、Rep蛋白とOri部位との結合には、強弱2つの様式があることも示唆された。5.15種類のColE群プラスミドの複製領域の塩基配列を決定し、Rep蛋白遺伝子、Ori部位など同定した。ColE2、ColE3を含めて4種類のRep蛋白とOri部位との相互作用の特異性グル-プが存在することが解った。今後は、ColE2、ColE3以外のColE群プラスミドのRep蛋白やキメラRep蛋白を含めて、in vitroのDNA合成反応の解析、Rep蛋白とOri部位の結合の解析なども行い、Rep蛋白の示す種々の機能を担うドメインの同定を試みる研究を計画している。

ColE2 and ColE3 are responsible for replication initiation protein (Rep protein, 35Kda) and replication initiation site (Ori site, about 35 Kda). This year's research has revealed the following findings. 1. The specificity of the interaction between Rep protein and Ori site is determined by the combination of the acid alignment of the part of Rep protein in the 2 sites of Ori site about 3 minutes on the C terminal side. 2. Molecular genetic analysis of the nature of ORI site deletion, interaction of ORI site with Rep protein, necessary domain of DNA replication initiation, necessary domain of Rep protein, and molecular genetic analysis of ORI site deletion. 3. Reproducibility of Rep protein was established by high purity purification method. 4. Refined Rep protein is analyzed by the method of binding and purification. The strong interaction domain of Rep protein in Ori site exists, and the binding domain of Rep protein in Ori site and adjacent domain is induced.また、Rep蛋白とOri部位との结合には、强弱2つの様式があることも示唆された。5.15 The type of ColE group is determined by the base alignment of the replication domain, and the Rep protein and Ori sites are determined. ColE2 and ColE3 contain four types of Rep proteins and Ori sites that interact with each other specifically. In the future, we plan to study the function of Rep protein in ColE group other than ColE2 and ColE3, analyze the DNA synthesis reaction in vitro, analyze the binding between Rep protein and Ori site, and determine the identity of Rep protein.

项目成果

Itoh,Tateo In James,R.et al.(eds.): "Replicon evolution of ColE2ーrelated plasmids" Bacteriocins,Microcins and Lantibiotics.NATO ASI series. (1992)

Itoh,Tateo In James,R.et al.(eds.)：“ColE2 相关质粒的复制子进化”Bacteriocins、Microcins 和 Lantibiotics。NATO ASI 系列（1992）。

Kido,Mituru: "Identification of a plasmidーcoded protein required for initiation of ColE2 DNA replication" Nucleic Acids Research. 19. 2875-2880 (1991)

Kido, Mituru：“启动 ColE2 DNA 复制所需的质粒编码蛋白的鉴定”《核酸研究》19. 2875-2880 (1991)。

Eguchi,Yutaka: "Antisense RNA" Annual Review of Biochemistry. 60. 631-652 (1991)

Eguchi，Yutaka：“反义RNA”生物化学年度评论。

Nomura,Nobuo: "Identification of eleven singleーstrand initiation sequences for priming of DNA replication in F,R6K,R100 and ColE2 plasmids" Gene. 108. 15-22 (1991)

Nomura, Nobuo：“在 F、R6K、R100 和 ColE2 质粒中启动 DNA 复制的 11 个单链起始序列的鉴定”Gene。 108. 15-22 (1991)