リソゾームとパルオキシゾームのタンパク質輸送に抱ける膜結合性ATPaseの機能

膜结合 ATP 酶在溶酶体和偶酶体之间蛋白质转运中的功能

• 批准号: 04259210
• 负责人: 大熊 勝治
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04259210/
• 关键词: リソゾーム; パルオキシゾーム; プロトン・ポンプ; ATPase; 再構成; 膜融合; GTP結合蛋白質; クロフィプレート

リソゾーム膜より可溶化(精製)したH^+-ATpaseをリポソームに組み込み,プロトン・ポンプ活性の再構成に功成した.再構成系での研究の結果,リソゾーム膜上にクロライドチャンネルの存在すること,プロトン・ポンプ活性は,リソゾーム内部からクロライドによって活性化されること,また,NO_3^-の作用部位もH^+-ATPaseのリソゾーム内側に存在する可能性を示唆する結果を得た.リソゾームにおけるタンパク質輸送機能発現の際に,リソゾームの膜融合反応にH^+-ATPaseが機能している可能性があり,これをATP-依存性リソゾーム崩壊の実験系で検討した.その結果,サイトゾル中に,リソゾームの安定化と膜融合促進活性の存在することを発見した.リソゾーム安定化因子は44kDaのサブユニットタンパク質の三量体と想像される120kDaの分子量を示した.現在,膜融合因子の実態を分析している.また,リソゾームがGTR-γ-S依存的に崩壊する現象を発見した.サイトゾル中の低分子量GTP結合タンパク質の実態を現在解明中である.リソゾーム膜上にもGTP結合タンパク質が存在することを発見しており,タンパク質輸送とGTP結合タンパク質の意義に大変興味が持たれる.一方,クロフィブレートを投与したラットの肝臓ペルオキシゾーム膜上に誘導されるNEM感受性ATPaseは、DCCDやTBT等によっても阻害されるとともに,ある条件下にはミトコンドリアF_0F_1-ATPaseの選択的阻害剤とされるオリゴマイシンによっても阻害されることを見いだした.NEM感受性ATPaseはF-タイプの新しいH^+-ATPaseである可能性があり,現在生化学的に解析中である.また,本ATPaseがタンパク質輸送に働いている可能性について,acyl CoA oxidaseのペルオキシゾームへのin vitro輸送系を用いて検討すると共に,本ATPase基質輸送に働いている可能性についても,Acyl CoA輸送系を用いて調べている.

リ ソ ゾ ー ム membrane よ り solubilization (refined) し た H ^ + - ATpase を リ ポ ソ ー ム に group み 込 み, プ ロ ト ン · ポ ン プ active の reconstitution に successful し た. To constitute a system で の の research results, リ ソ ゾ ー ム membrane に ク ロ ラ イ ド チ ャ ン ネ ル の is す る こ と, プ ロ ト ン · ポ ン プ active は リ ソ ゾ ー ム internal か ら ク ロ ラ イ ド に よ っ て activeness さ れ る こ と, ま た, NO_3 も H ^ ^ - function の parts + - ATPase の リ ソ ゾ ー ム exist inside に す を る possibility Results of stopping す る を た. リ ソ ゾ ー ム に お け る タ ン パ ク the mass transport function 発 now の に, リ ソ ゾ ー ム の membrane fusion against 応 に H ^ + - ATPase が function し て い る possibility が あ り, こ れ を ATP - dependence リ ソ ゾ ー ム collapse 壊 の be 験 department で beg し 検 た. そ の results, サ イ ト ゾ ル に, リ ソ ゾ ー ム の stabilization と membrane Integration to promote active の is す る こ と を 発 see し た. リ ソ ゾ ー ム stabilization factor は 44 kda の サ ブ ユ ニ ッ ト タ ン パ ク quality の three quantity body と imagine さ れ る 120 kda の を molecular weight shown し た. Now, membrane fusion factor の を analysis be state し て い る. ま た, リ ソ ゾ ー ム が GTR - dependent に gamma - S collapse 壊 す る phenomenon を 発 see し た. サ イ ト ゾ ル の low molecular weight in the GTP combination made タ ン パ ク qualitative の state be を now focuses で あ る. リ ソ ゾ ー ム membrane に も GTP combination made タ ン パ ク qualitative が exist す る こ と を 発 see し て お り, タ <s:1> パ nutrient transport とGTP combined with タ パ パ nutrient <s:1> significance に greatly increased interest が support たれる Side, ク ロ フ ィ ブ レ ー ト を cast with し た ラ ッ ト の is crucial liver ペ ル オ キ シ ゾ ー ム induced membrane に さ れ る NEM susceptibility ATPase は, DCCD や TBT and に よ っ て も resistance against さ れ る と と も に, あ る conditions に は ミ ト コ ン ド リ ア F_0F_1 - ATPase の sentaku's resistance against tonic と さ れ る オ リ ゴ マ イ シ ン に よ っ て も resistance against さ れ る こ と を see い だ し た. NEM susceptibility ATPase は F - タ イ プ の new し い H ^ + - ATPase で あ る possibility が あ り, now in biochemistry に resolution で あ る. ま た, the ATPase が タ ン パ ク mass transport に 働 い て い る possibility に つ い て, acyl CoA Oxidase の ペ ル オ キ シ ゾ ー ム へ の in vitro transportation department を い て beg す 検 る と に, the ATPase matrix transmission に 働 い て い る possibility に つ い て も, Acyl CoA transportation department を い て adjustable べ て い る.

项目成果

Sakae Shimizu: "Inorganic pyrophosphatase of clofibrate-induced rat liver peroxisomes" J.Biochim.(Tokyo). 113. (1993)

Sakae Shimizu：“氯贝特诱导的大鼠肝脏过氧化物酶体的无机焦磷酸酶”J.Biochim.（东京）。

Sakae Shimizu: "Induction and characterization of two types of ATPase on rat liver peroxisomes" J.Biochem.(Tokyo). 112. 376-384 (1992)

Sakae Shimizu：“大鼠肝脏过氧化物酶体上两种 ATP 酶的诱导和表征”J.Biochem.（东京）。

Hidetoshi Hayashi: "Three types of membranous ATPase on rat liver lysosomes" Chem.Pharm.Bull.40. 2783-2786 (1992)

Hidetoshi Hayashi：“大鼠肝溶酶体上的三种膜 ATP 酶”Chem.Pharm.Bull.40。

Sakae Shimizu: "Major ATPases on clofibrate-induced rat liver peroxisomes are not associated with 70 kDa peroxisomal membrane protein(PM70)" J.Biochem.(Tokyo). 112. 733-736 (1992)

Sakae Shimizu：“氯贝特诱导的大鼠肝脏过氧化物酶体上的主要 ATP 酶与 70 kDa 过氧化物酶体膜蛋白 (PM70) 无关”J.Biochem.（东京）。

Jun-ichi Nezu: "Molecular cloning of a rat liver cDNA encoding the 16 kDa subunit of vacuolar H^+-ATPase:organellar and tissue distribution of 16 kDa proteolipids" J.Biochem.(Tokyo). 112. 212-219 (1992)

Jun-ichi Nezu：“编码液泡H+-ATP酶的16kDa亚基的大鼠肝脏cDNA的分子克隆：16kDa蛋白脂质的细胞器和组织分布”J.Biochem.（东京）。