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血管内皮細胞と血管平滑筋細胞の共存培養による細胞内Ca応答の相互作用の解析

血管内皮细胞与血管平滑肌细胞共培养细胞内Ca2+反应的相互作用分析

基本信息

批准号：
04263212
负责人：
豊岡照彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04263212/
关键词：
共存培養 EDRF 細胞内カルシウム autocrive現象 paracrive現象

项目摘要

本年度の研究助成を頂き、下記の成果を挙げ、論文発表する事ができた。(1)血管平滑筋細胞と内皮細胞の共存培養血管細胞の生理、薬理研究には、上記二種の細胞を各々単独に培養したのでは不十分で、更に生体に近い条件の共存培養が理想とされている。当研究室では多くの試行錯誤の結果、両者の共存培養条件を確定した。(2)共存培養における薬理実験血管細胞刺激として低濃度のATPを用いると、投与間隔を30分以上空ければ連続投与しても同一の反応を再現できる事が示された。この為以下の薬理実験に非常に有益であった。平滑筋細胞または内皮細胞のみ培養してTAP刺激をすると、両者とも一過性に細胞内Ca^<2+>濃度が増加し、3分後に投与前の値に戻る事を、既に筆者らの開発した二次元蛍光画像解析装置で観測した。次に両者を共存培養して同一条件で刺激すると、内皮細胞内Ca^<2+>濃度は単独培養の時と同様一過性に上昇したが、興味有る事に隣接する平滑筋細胞内のCa^<2+>濃度は約2秒遅れて下降し、約5分後に前値に復した。上記の反応は内皮細胞から放出されるEDRFの作用による事を、lNMMA.メトヘモグロビンおよびメチレン青で確認した。しかし、エンドセリンやPGI_2(プロスタサイクリン)の作用ではない事も、各々の中和抗体や合成阻害剤の投与によって確認した。またこの過程でEDRF阻害剤の作用として、平滑筋細胞内Ca^<2+>動態の変化は、そのpceracrive作用として説明され、内皮細胞内Ca^<2+>の変化は、自身の細胞のEDRFが働きかけるautocrive作用として、説明された。

This year's research assistance is at the top of the list, and the results are listed below. (1)The physiological and biological study of vascular smooth muscle cells and endothelial cells in culture When the laboratory was tested, many errors were found, and the co-culture conditions were determined. (2)The blue shift culture medium was used to stimulate vascular cells at low concentrations of ATP, and the interval was more than 30 minutes. This is very helpful for the following reasons. The smooth muscle cells were cultured with TAP stimulation, and the intracellular Ca <2+> concentration was increased transiently after 3 minutes. The Ca^<2+> concentration in endothelial cells increased transiently at the same time of culture, and decreased transiently at the same time of culture. The Ca ^<2+> concentration in smooth muscle cells decreased about 2 seconds after culture, and recovered about 5 minutes later. The effect of EDRF on endothelial cells was confirmed by the above analysis. The effect of PGI_2 on the immune system was investigated. The neutralizing antibodies and synthetic inhibitors were identified. The effects of EDRF inhibitors on intracellular Ca^<2+> dynamics in smooth muscle cells and on intracellular Ca^<2+> dynamics in endothelial cells are described.