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心血管系細胞内Caイオン代謝蛋白の細胞工学的および遺伝子工学的解析とその臨床応用:特にその発現機構の解析

心血管细胞内钙离子代谢蛋白的细胞工程和基因工程分析及其临床应用：特别是其表达机制的分析。

基本信息

批准号：
03404031
负责人：
豊岡照彦
金额：
$ 14.85万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (A)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

研究助成を頂き、当初の研究予定を80%程度達成することができた。関係各位に深謝するとともに、以下その成果を箇条書で記載する。1.血管平滑筋細胞内Caイオン(〔Ca^<2+>〕)_1)動態を2次元画像として解析する機器を独自に開発して研究に供した。この結果血管平滑筋は〔Ca^<2+>〕_1の調節系は決して単一でなく、細胞の増殖過程に依存して電位依存性Caチャンネル、IP_3作動性CaチャンネルとCa^<2+>/カフェイン/リオニジン作動性Caチャンネルは独立に機能発現する事が示された。2.血管内皮細胞と平滑筋細胞の共存培養させ、両者の〔Ca^<2+>〕_1動態を同時観測することに世界で初めて成功した。内皮細胞の刺激物質としてATPを用いた時、単独培養下では内皮細胞も平滑筋細胞も〔Ca^<2+>〕_1は一過性に上昇したが、両者の共存培養では上記の内皮細胞の反応に約5秒ほど遅れて、隣接する血管平滑筋細胞の〔Ca^<2+>〕_1が一過性に減少した。これらの反応にはdown-regulationやtachyphylaxisは認められなかった。共存培養の時に認められた平滑筋細胞内の〔Ca^<2+>〕_1の低下はATP刺激により内皮細胞からEDRFが生産され、隣接する血管平滑筋に作用する結果である事を各種EDRF遮断物質を用いて証明した。2.脂質の中で最も動脈硬化を来す作用の強いlysophosphatidylcholineは上記EDRFの作用を抑制し、ATPによる血管平滑筋細胞の〔Ca^<2+>〕_1低下作用を減弱させ、その拡張機能を妨げる事を示した。この結果は動脈硬化発生の機序に重要な一石を投じる物と自負している。3.ET_A,ET_B受容体がエンドセリン-1と-2を認識する部位を分子生物学的にキメラ遺伝子を設計し、COS細胞にtransfectionして検討して各エンドセリンの結合と〔Ca^<2+>〕_1測定実験から、受容体のIとIV,V,VI,VIIの膜貫通部分が認識部位である事を証明した。4.臨床研究として冠攣縮性狭心症の発症にはエンドセリンの血中濃度が高い事と、これに他の要因が加わる事が必要である事を提唱した。以上の諸結果は3年間で19編の英文原著論文にまとめられ(裏面の発表論文一覧を参照)、更に2編投稿準備中である。今後はこれらin vitro中心の結果をin vivoの研究に発展させ、動脈硬化の病態解明と治療に応用する予定である。

Research assistance is at the top, and initial research estimates are 80% achieved. Thank you very much. The following articles are recorded. 1. The dynamics of intracellular Ca (Ca^<2+>)_1 in vascular smooth muscle cells were studied by two-dimensional imaging and analysis. As a result, the regulation system of vascular smooth muscle [Ca^<2+>]_1 is independent, the potential-dependent Ca ^+ generation and the IP_3-activated Ca ^+ generation are dependent on cell growth, and the independent function of Ca^<2+>/Ca ^+/Ca ^+ generation is independent. 2. The culture of vascular endothelial cells and smooth muscle cells was successfully carried out in the world. When ATP was added to endothelial cells, Ca <2+> 1 of endothelial cells and smooth muscle cells increased transiently in culture alone, while Ca <2+> 1 of adjacent smooth muscle cells decreased transiently in culture alone. The down-regulation tachyphylaxis is the opposite of the down-regulation tachyphylaxis. The effect of EDRF on endothelial cells and vascular smooth muscle cells was demonstrated by the use of various EDRF blocking substances. 2. Lysophosphatidylcholine, a potent inhibitor of the role of EDRF in atherosclerosis, attenuates the effect of ATP on [Ca^<2+>]_1-lowering in vascular smooth muscle cells, and impairs their function. The results are important for the mechanism of atherosclerosis. 3. Design of molecular biology for the recognition of receptor sites in ET_A, ET_B, COS cell transfection, detection of binding of receptor sites in COS cells, and demonstration of recognition of membrane penetration sites in receptors I, IV,V,VI,VII. 4. Clinical research on coronary contracture heart disease is necessary to improve the blood concentration of coronary contracture heart disease. The above results include 19 original English papers in 3 years, and 2 original English papers in preparation. Future findings from the vitro center will be developed in vivo and used for the diagnosis and treatment of atherosclerosis.