リボザイムの生体内での機能発現

核酶体内功能表达

• 批准号: 05210208
• 负责人: 大島 靖美
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05210208/
• 关键词: アンチセンス; 海馬; 空間学習; カルシニューリン; mRNA; ラット

まず、オリゴの細胞への取り込みを調べるために、培養細胞を用いた実験を行った。^<32>Pで標識したオリゴを用いた実験では、培地中に加えたオリゴは1〜2%程度取り込まれることを確認した。また、蛍光標識したオリゴを用いた実験においても、オリゴが細胞に取り込まれていることを確認した。さらに、オリゴの脳内での拡散と取り込みを調べるために、蛍光標識したカルシニューリンA_<alpha>に対するアンチセンスオリゴをラット海馬に微量注入した。その結果、蛍光は海馬及び歯状回のほぼ全域に見られ、特に神経細胞に強く見られた。このことより、オリゴが海馬において確かに神経細胞に取り込まれていることが解ったため、アンチセンスオリゴの効果を調べるための学習実験に移った。学習実験には、モーリス水迷を用いた。現在までに得られている結果では、オリゴを注入したラットの方が若干成績がよいが、その差は統計的に有意ではない。そこで、コントロールとオリゴを注入したラットの海馬でカルシニューリンA_<alpha>のmRNA及びタンパク量の変化を調べた。しかし、RT-PCR及びWestern blot解析の結果、mRNA、タンパク量共に変化が見られなかった。これにより、オリゴの効果が弱いか、又は全く効果がないということが考えられる。そこで、オリゴの効果をあげるために、修飾オリゴを用いることやオリゴの標的部位を変えることを考えている。また、本実験においてはカルシニューリンA_<alpha>の発現を阻害することにより学習能力が向上すると考えているが、今用いているスケジュールにしたがった学習実験では、コントロールのラットが足場の位置を覚えるのが早過ぎる。そのため、コントロールとオリゴを注入したラットの間に差が出やすいように学習実験のスケジュールを組みなおすことも考えている。

The cells were cultured in vitro. <32>P The light mark is used to identify the cell. A microinjection into the hippocampus was carried out at the same time as a microinjection into the <alpha>hippocampus The result is that the hippocampus and dentate gyrus are all visible, especially in the nervous system. This is the first time that the brain has been able to learn from the brain. Learning is a very difficult task. The results of this study are as follows: The <alpha>expression of mRNA and protein is regulated by the expression of mRNA and protein. The results of RT-PCR and Western blot analysis, mRNA and protein levels were analyzed. The result of the test is that the test results are weak, and the test results are negative.そこで、オリゴの効果をあげるために、修饰オリゴを用いることやオリゴの标的部位を変えることを考えている。This is the first time that A person has learned a lesson<alpha>. All right, all right. All right, all right, all right.