線虫における神経回路形成の分子機構
线虫神经回路形成的分子机制
基本信息
- 批准号:10156230
- 负责人:
- 金额:$ 1.15万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:1998
- 资助国家:日本
- 起止时间:1998 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
(A) UNC-51のキナーゼ(リン酸化)活性のin vitroにおける証明と解析1. unc-51cDNAの全長、全長のcDNAでキナーゼドメインにK→M変異をもつもの、キナーゼドメイン、C末側ドメインのそれぞれのC末側にMyc tagを付しpUcD2SR α MCSベクターに挿入した。これらをCOS7細胞に導入し、融合タンパクの一時的発現を粗抽出液と抗Myc抗体で調べた。2. 細胞の粗抽出液を抗Myc抗体結合ビーズによって処理し、後者に結合した分画を用いて、in vitroでキナーゼ活性を調べた。この結果、全長のUNC-51及びそのキナーゼ領域のcDNAを導入した場合には、外から加えたヒストンH1及び内在性のいくつかのタンパク質のリン酸化が示された。3. 上記の発現系では発現が不充分であると考えて、現在pCAGGSベクターによる発現を試みている。これを用いて、UNC-51の自己リン酸化とその部位を明らかにする予定である。(B) UNC-51とUNC-14の相互作用及びこれらと相互作用する因子の解析1. UNC-51、UNC-14のそれぞれにつき、抗原性があり得る3つの部分ペプチドを合成し、ウサギに免疫して、抗血清及び精製抗体を得た。これらにより、in vivoでのUNC-51とUNC-14の共存と結合を証明したい。2. UNC-51と相互作用すると考えられるタンパク質のcDNAの中でTHB28はEB1ホモログをコードし、このタンパクはtwo hybrid系においてUNC-14とも相互作用することが示されている。またTHB7,THB47はそれぞれ哺乳動物のMSK及びJNK kinaseのホモログをコードしている。UNC-51の基質も含めて、UNC-51.UNC-14と相互作用する因子を明らかにするため、これらの遺伝子の解析を行っている。
UNC (A) - 51 の キ ナ ー ゼ (リ ン acidification) active の in vitro に お け る prove と resolution 1. UNC - 51 cDNA の span, total length of の cDNA で キ ナ ー ゼ ド メ イ ン に K - M - different を も つ も の, キ ナ ー ゼ ド メ イ ン, at the end of the C side ド メ イ ン の そ れ ぞ れ の C at the end of the lateral に Myc tagを insert pUcD2SR α MCSベ タ タ タ に に insert た. <s:1> れらをCOS7 cells に are introduced into に and fused with タ タ パ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> を a temporary appearance of を the crude extract と anti-myc antibody で is adjusted べた. 2. Cells の crude extract を Myc antibody resistance combined with ビ ー ズ に よ っ て 処 し, the latter に combining し た points を used い て, the in vitro で キ ナ ー ゼ activity を adjustment べ た. こ の results, the total length of の UNC - 51 and び そ の キ ナ ー ゼ field の cDNA を import し た occasions に は, outside か ら plus え た ヒ ス ト ン H1 and び internality の い く つ か の タ ン パ ク qualitative の リ ン acidification が shown さ れ た. 3. Written の 発 now is で は 発 presently inadequate が で あ る と exam え て, now pCAGGS ベ ク タ ー に よ る 発 を now try み て い る. <s:1> れを use れを て and UNC-51 <s:1> to acidify the とそ <s:1> site を and ら ら にする to determine である. (B) UNC - 51 と UNC - 14 の interaction and び こ れ ら と interaction す る factor analytical 1. の UNC - 51, UNC - 14 の そ れ ぞ れ に つ き, antigenicity が あ り have る 3 つ の part ペ プ チ ド を synthetic し, ウ サ ギ に immune し て, antiserum and び refined antibody を た. Youdaoplaceholder2 れらによ で, in vivoで, <s:1> UNC-51と, UNC-14 <s:1> coexisting と combined with を to prove that た た を. 2. Interaction between UNC - 51 と す る と exam え ら れ る タ ン パ ク qualitative の cDNA in の で THB28 は EB1 ホ モ ロ グ を コ ー ド し, こ の タ ン パ ク は two hybrid system に お い て UNC - 14 と も interaction す る こ と が shown さ れ て い る. ま た THB7, THB47 は そ れ ぞ れ mammals の MSK and び JNK kinase の ホ モ ロ グ を コ ー ド し て い る. UNC - 51 の matrix contains も め て, UNC - 51. UNC - 14 と interaction す る factor を Ming ら か に す る た め, こ れ ら の heritage 伝 son の parsing line を っ て い る.
项目成果
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