放射光を利用した時間分割ラウエ法による酵素反応過程追跡実験法とトリガーの開発

开发使用同步辐射的时间分辨劳厄法跟踪酶反应过程的实验方法和触发器

• 批准号: 05244204
• 负责人: 原田 繁春
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05244204/

Streptomyces caespitosusが生産する中性プロテアーゼSCNPを使って以下に述べるような実験を行なった。(1)基質阻害剤(N-CBZ-Gly-Tyr)との複合体結晶を調製し、高エネルギー物理学研究所放射光実験施設BL18Bに設置されているラウエカメラでデータ測定を行ない、ラウエデータの質の評価を行なった。測定は白色X線を使い、回折強度データを11枚のイメージングプレートに記録した。また、比較のため自動4軸回折計でもデータ測定を行なった。その結果、2.5A分解能までについてラウエ法で測定したデータは当初の予想通り、単色X線の場合に比ベて同価な反射の一致度が悪く(Rsym,Rmergeとも20%くらい)、測定できた反射数も本来測定すべき数の60%くらいしかなかった。しかし、4軸回折計で測定したnativeデータとの差フーリエ図を計算してみると、ラウエデータでもSCNPの活性部位に基質阻害剤に対応する電子密度が見られた。その電子密度は単色X線で測定したデータを使った場合にくらべてノイズが多いものの、十分解釈ができるだけの質を備えていた。また、結晶は白色X線によるダメージをほとんど受けなかったのでSCNPの結晶は時分割構造解析を行なうための基本的な条件を備えていることがわかった。(2)SCNPは活性部位に亜鉛原子が存在し、活性に強く関与している。この亜鉛原子を他の金属に置き換え、その結果反応速度が減少すれば、時分割構造解析によって反応中間体の構造を明らかにするために役に立つと考えた。そこで、種々の金属置換体SCNPを調製し活性を測定すると共に、結晶化した。5種の金属置換体SCNPのうちCo置換体がnativeに比べて活性が低下したが、現在のところ結晶が得られたのは、活性が上昇したMn置換体のみである。

Streptomyces caespitosus が production す る neutral プ ロ テ ア ー ゼ SCNP を make っ て に below mentioned べ る よ う な be 験 を line な っ た. Substrate resistance against one (1) (N - CBZ - Gly - Tyr) と の complex crystal を し modulation, high エ ネ ル ギ ー physics research institute of radiation light be 験 facilities BL18B に set さ れ て い る ラ ウ エ カ メ ラ で デ ー タ measurement line を な い, ラ ウ エ デ ー タ の qualitative の review 価 を line な っ た. The <s:1> white X-ray を was used to determine the を and the folding strength デ タを タを タを タを of 11 pieces of <s:1> メ メ ジ ジ ジ グプレ グプレ トに トに トに トに and recorded the た た. Youdaoplaceholder0, compare ため, automatic 4-axis foldback meter で ため デ タ タ measure を rows なった. そ の result, 2.5 A decomposition can ま で に つ い て ラ ウ エ で method to determine the し た デ ー タ は の original to think り, 単 X-ray に の occasion than ベ て with 価 な reflection の consistency が 悪 く (Rsym, Rmerge と も 20% く ら い), determining で き た reflection number も originally determination す べ き の 60% く ら い し か な か っ た. し か し, 4 axial inflexion で determination し た native デ ー タ と の poor フ ー リ エ 図 を computing し て み る と, ラ ウ エ デ ー タ で も SCNP の active site に substrate resistance against tonic に 応 seaborne す る electron density が see ら れ た. そ の electron density は 単 color determination of X-ray で し た デ ー タ を make っ た occasions に く ら べ て ノ イ ズ が more い も の の, ten decomposition 釈 が で き る だ け の qualitative を prepared え て い た. ま た, crystallization は white X-ray に よ る ダ メ ー ジ を ほ と ん ど by け な か っ た の で SCNP の crystallization は segmentation structure line を な う た め の basic を な conditions for え て い る こ と が わ か っ た. (2) The に亜 lead atom が in the <s:1> active site of SCNP has a strong く relationship with <s:1> and に activity and る て る る る る. こ の 亜 lead atoms を he の metal に buy き change え, そ の results against が 応 speed reducing す れ ば, time division structure parsing に よ っ て anti 応 intermediates の tectonic を Ming ら か に す る た め に に service set つ と exam え た. Youdaoplaceholder0 すると で, determination of the を modulated <s:1> activity を of various 々 <s:1> metal displacement SCNP すると, すると co-に, crystallization た. Five の metal replacement body SCNP の う ち Co replacement body が native に than べ て active low が し た が, now の と こ ろ crystallization が have ら れ た の は rising, active が し た Mn replacement body の み で あ る.