膜結合性コハク酸ユビキノン酸化還元酵素複合体のX線結晶解析

膜结合琥珀酸泛醌氧化还原酶复合物的 X 射线晶体分析

• 批准号: 16048203
• 负责人: 原田 繁春
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kyoto Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16048203/
• 关键词: 複合体II; 膜蛋白質; 結晶化; 電子伝達系

大腸菌ComplexIIはファーメンター培養した大腸菌の内膜から、回虫ComplexIIは回虫筋肉ミトコンドリアから界面活性剤で可溶化しイオン交換クロマトグラフィーで精製した。結晶化は精製したComplexIIの膜貫通部を覆っている界面活性剤を結晶化に適した界面活性剤に置換し、ポリエチレングリコールを沈澱剤に使って透析法で行った。X線回折実験はSPring8で行った。大腸菌と回虫のComplexII結晶はともに3Å程度の分解能を示すが、液体窒素による凍結下でもX線照射による放射線損傷が認められ、データ測定の過程で分解能が著しく低下していった。そこで損傷を受けた結晶を新しい結晶に交換しながら、大腸菌ComplexIIについては約3000枚、回虫ComplexIIについては約4000枚の回折パターンをイメージングプレートを使って記録した。これらのイメージの中から放射線損傷の少ないものを選びだし、データ処理プログラムHKL2000で回折強度データに変換し、回虫のComplexIIについては3Åの分解能回折強度データを得た。このデータをもとに微生物由来のComplexIIの立体構造をモデルとして分子置換法を適用したところ解が得られたので、立体構造の精密化に着手した。しかし、モデル構造と回虫ComplexIIとはアミノ酸配列の相同性(30%程度)の低さから予想されるように、大きく構造の異なる部分があり、そこでは電子密度図へのフィッティングが困難である。そこで、重原子同形置換法で求めた電子密度図を利用して構造解析・精密化を進めるために重原子誘導体結晶を調整し、回折強度データを測定した。現在、これらのデータをもとに構造解析を進めている。一方、ウシ心筋ミトコンドリア由来のComplexIIについても精製・結晶化を試みたところ、十分に精製されたサンプルではなかったが結晶が得られた。しかし、回折をほとんど示さなかっためで精製法や結晶化条件の最適化を行っている。

The ComplexII fungus was incubated in the intima, ComplexII in the intima, and ComplexII in the guinea pig. The interfacial activity was soluble. Results the results showed that the interfacial activity of ComplexII membrane was better than that of the dialysis method. The X line is folded back to the SPring8 line. Rhizoctonia spp. ComplexII results show that the degree of decomposition can be measured by X-ray irradiation under liquid asphyxiate temperature, and the process decomposition can be determined by X-ray irradiation under liquid asphyxiation temperature. The results showed that the new results showed that there were about 3000 ComplexII spores, and about 4000 ComplexII spores. The results of the new results showed that the data were recorded. In the middle of the experiment, you need to select the correct value, the strength of the HKL2000, the strength of the ComplexII, the strength of the decomposition, the strength of the decomposition. The origin of microorganisms, ComplexII, stereo, molecular, molecular In this paper, the homology (30% degree) of the homogeneity of the ComplexII temperature field, the temperature, the temperature and the temperature. The calculation of electron density by the method of isomorphic displacement of heavy atoms and heavy atoms. The precision of analytical analysis is used to refine the crystal structure of heavy atom alloys, and to determine the strength of heavy atoms. At present, it is necessary to improve the analysis and analysis of the system. On the one hand, the reason for the problem is that the results of the ComplexII analysis show that the results are very good. The results show that the crystallization conditions are the most effective.