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Zn-金属プロテアーゼの立体構造と構造・機能相関に関する研究

锌金属蛋白酶的三维结构及构效关系研究

基本信息

批准号：
07672416
负责人：
原田繁春
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672416/
关键词：
金属プロテアーゼ X線構造解析構造・機能相関

项目摘要

Streptomyces caespitosusが産出する亜鉛プロテアーゼScNPは132個のアミノ酸残基からできており、83-87番目にかけて亜鉛プロテアーゼに共通に見いだされているHEXXH配列が存在している。これまで発見されている亜鉛金属プロテアーゼの中では最も分子量が小さく、他とのアミノ酸配列の相同性も見られない。立体構造は5本のβ鎖から成るβシートと3本のαヘリックスからできている。HEXXH配列(His83-Glu-Thr-Gly-His87)は2番目のヘリックス上に存在し、His83、His87、Asp93、水分子が亜鉛に対して4面体配位している。これまでにアミノ酸配列と立体構造が決定されている他の亜鉛金属プロテアーゼも、HEXXH配列中の2つのヒスチジンと水分子が配位し、ScNPとはアミノ酸残基の数・アミノ酸配列が異なるにも関わらず良く似たの主鎖のfoldingとなっている。ScNPの活性測定をアゾカゼインを基質として行なったところ、最適pHは5〜6、最適温度は40℃であることがわかった。また、CDスペクトルから60℃付近まで立体構造は安定に保たれることがわかった。基質特異性はインスリンB鎖をScNPで加水分解し、生じたペプチド断片を単離・分析して調べた。その結果、インスリンB鎖はチロシンとフェニルアラニンのN末端側で切断されていることがわかった。次に、ScNPの芳香族アミノ酸に対する基質特異性を構造化学的に理解するために阻害剤との複合体結晶の構造解析を行なった。その結果、阻害剤として使ったN-CBZ-Gly-Tyrのベンジルオキシカルボニル基のカルボニル酸素が亜鉛原子に配位していることがわかった。また、阻害剤が結合しているクレフト中にはポケットがあり、その壁は側鎖のない3つのグリシン残基で囲まれていた。芳香族アミノ酸の大きな側鎖が入り込むのに都合が良いように思われる。すなわち、このポケットがチロシンやフェニルアラニンの認識部位であると想像することができる。

Streptomyces caespitosus reports that there are significant differences in the distribution of acid residues in the ScNP, and between 83 and 87 in the same class. There is a significant difference between the two groups in HEXXH allocation. I can see that the molecular weight of the metal is the lowest, the molecular weight of the metal is the lowest, the molecular weight of the acid is the same, and the molecular weight is the lowest. Three-dimensional production of 5 copies of β books into 3 copies of alpha books. HEXXH ligand (His83-Glu-Thr-Gly-His87), His83, His87, Asp93, water molecule, tetrahedral coordination, tetrahedral coordination. In the HEXXH alignment, the coordination of water molecules, the number of acid residues, the number of acid residues, the The activity of ScNP was determined by temperature measurement, temperature, temperature and temperature. Please pay near 60 ℃ for three-dimensional stability at 60 ℃. You will be able to keep your money safe and stable. Please pay CD. The basic characteristic is that the water is decomposed by adding water, the ScNP is decomposed, the fragments are separated and analyzed. The results are as follows: the results, the results and the results. Secondary, ScNP, aromatic, acid, acid, basic, chemical, chemical and chemical properties. The result of the experiment and the hindrance to the results show that there is no significant difference between the two groups in terms of N-CBZ-Gly-Tyr and atomic coordination. The combination of the block and the block is used to detect the residue in the wall, which is different from that in the wall. The aromatic family is full of acid, acid and acid. You know, imagine something.