核分裂と核融合に必須な酵母核膜タンパク質Nep98pの機能解析

核裂变和融合所必需的酵母核膜蛋白 Nep98p 的功能分析

• 批准号: 13043022
• 负责人: 遠藤 斗志也
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13043022/
• 关键词: 小胞体; 核融合; 酵母; スピンドル極体; 接合

申請者らは,酵母接合時の核内膜融合に必須な因子として,小胞体内腔の新規DnaJホモログJem1pを発見,さらにJem1pと相互作用する核膜タンパク質Nep98pを同定した。Nep98pは核膜融合に関与するが,増殖に必須であり,その変異株はG2/M期で細胞周期の進行が停止し,紡錘体形態に異常が見られた。そこでNep98pの機能を明らかにするために以下の実験を行った。(1)GFPとNep98pの融合タンパク質(NEP98遺伝子の破壊株の致死性を相補できる)は,過剰生産しない状態で核膜の特にSPB(スピンドル極体)に局在することが明らかになった。したがってNep98pがSPB形成および機能発現に関わっている可能性を支持する結果が得られた。(2)Nep98pの様々な部分欠失体を用いた解析から,Nep98pの内腔側は核膜局在に必要ないが,Nep98pのサイトゾル側の65〜145残基が核膜局在に必須であること,この領域が核膜融合の特に内膜融合よりも前のステップに必須であること,Nep98pの431〜650残基は酵母の増殖およびJem1pとの相互作用に必須であることを見いだした。また(3)Nep98pのJem1p相互作用領域をbaitとして酵母two-hybrird法を用いたスクリーニングを行い,Nep98pと相互作用する因子の検索を行った。その結果,Yfl042pおよびYlr072pという内在性膜タンパク質と思われる候補を得た。しかしこの二つのタンパク質の遺伝子を同時に破壊しても増殖や核融合に影響が見られら無かったので,それらがNep98pの真のパートナーであるかどうかは,さらに解析が必要である。

The applicant stated that the factors necessary for fusion of the nuclear membrane during yeast conjugation, the new rules for the microcellular lumen, and the interaction between the nuclear membrane and the nuclear membrane, Nep98p, were determined. Nep98p is related to nuclear membrane fusion and proliferation, and all plants have G2/M cell cycle arrest and spindle morphology abnormalities. Nep98p's function is clear. (1)GFP and Nep98p fusion protein (Nep98 gene damage plant lethality complement), but in the production state of the nuclear membrane special SPB(Nep 98 gene protein) in the next stage. The results are achieved because Nep 98p supports the possibilities related to SPB formation and functional development. (2)Nep98 p is a partial deletion of Nep 98p,Nep98p 98 (3)Nep 98p and Jem 1p interaction domain bait and yeast two-hybrird method are used to detect the interaction factor of Nep 98p. As a result,Yfl042p Ylr072p In addition to the above, it is also necessary to analyze the nuclear fusion effect caused by the proliferation of nuclear fusion.

项目成果

西川周一, 遠藤斗志也(分担執筆): "分子シャペロンによる細胞機能制御(永田和弘, 森正敬, 吉田賢右編) 輸送:小胞体"66-74 (2001)

Shuichi Nishikawa、Toshiya Endo（撰稿人）：“分子伴侣控制细胞功能（由 Kazuhiro Nagata、Masataka Mori、Kensuke Yoshida 编辑）运输：内质网”66-74 (2001)

T.Endo, D.Kohda: "Functions of outer membrane receptprs in mitochondrial protein import"Biochim.Biophys.Acta. (in press). (2002)

T.Endo、D.Kohda：“线粒体蛋白输入中外膜受体的功能”Biochim.Biophys.Acta。

A.Kawai et al.: "Loss of the mitochondrial Hsp7O functions causes aggregation of mitochondria in yerast cells"J.Cell Science. 114. 3565-3574 (2001)

A.Kawai 等人：“线粒体 Hsp7O 功能的丧失导致酵母细胞中线粒体聚集”J.Cell Science。

T.Muto et al.: "NMR identification of the Tom2O binding element in mitochondrial presequences"J. Mol. Biol.. 306. 137-143 (2001)

T.Muto 等人：“线粒体前序列中 Tom2O 结合元件的 NMR 鉴定”J.

S.Nishikawa et al.: "Molecular chaperones in the yeast ER maintain the solubility of proteins for retro-translocation and degradation"J.Cell Biol.. 153. 1061-1039 (2001)

S.Nishikawa 等人：“酵母 ER 中的分子伴侣维持蛋白质的溶解度以进行逆向易位和降解”J.Cell Biol.. 153. 1061-1039 (2001)