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アクチン結合蛋白質コフィリンのストレス応答機構

肌动蛋白结合蛋白cofilin的应激反应机制

基本信息

批准号：
05268210
负责人：
西田栄介
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アクチン結合蛋白質コフィリンのアクチン結合様式の分子機構の解明のために、我々が同定したコフィリンのアクチン結合部位に相当する領域(12アミノ酸残基配列)の合成ペプチドを作製し、その合成ペプチドの解析を行った。その合成ペプチドは、アクチンと結合するとともにイノシトールリン脂質であるPIP2とも結合する。この合成ペプチドのNMRによる解析を行ったところ、このペプチド自体は溶液中で特定のコンフォメーションをとらないが、アクチンと結合するとある特定のコンフォメーションをとることがわかった。また、PIP2と結合した場合も同様の変化が起こること、アクチンとの結合様式とPIP2との結合様式は非常に似ていることなども明らかとなった。コフィリンはin vivoにおいてセリン残基がリン酸化されているが、そのリン酸化を担う蛋白質キナーゼを同定するために、大腸菌にコフィリンを発現させ、その組換えコフィリンを基質にして、細胞抽出液中にコフィリンリン酸化活性の検出を試みた。その結果、種々の細胞抽出液中に見かけ上のコフィリンキナーゼ活性が見い出された。大量に調整が可能なXenopus卵抽出液を用いて、分画・精製を進めようとしている。コフィリンの脱リン酸化を担うホスファターゼについては、キナーゼの同定後に行うつもりであったため、検索が行えなかった。今後、コフィリンキナーゼとコフィリンホスファターゼの同定を進め、両分子のストレス応答機構およびコフィリンのリン酸化、脱リン酸化による機能制御についてさらに解析を進める必要がある。

The molecular mechanism of the protein binding pattern was elucidated and the synthesis and analysis of the protein binding pattern were carried out in the corresponding domain (12-amino acid residue alignment) of the protein binding pattern. The combination of the two components is called PIP2 and PIP3. The composition of the sample was determined by NMR. In the case of PIP2 and PIP2, the same pattern is formed. In vivo, the protein residues were acidified, the protein residues were acidified, the protein residues were determined, the protein residues were detected in Escherichia coli, the protein residues were detected in the cell extracts, and the protein residues were acidified in cell extracts. The results showed that there was no activity in the extract of seed cells. A large number of adjustments can be made to Xenopus egg extract, which can be used, divided, refined and refined. When the time comes, we will not be able to get rid of it. In the future, it is necessary to advance in the analysis of the functional control of