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ヒトDNAミスマッチ修復蛋白質1遺伝子の構造と機能に関する分子生物学的研究

人类DNA错配修复蛋白1基因结构与功能的分子生物学研究

基本信息

批准号：
05270213
负责人：
島田隆
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトのDNAミスマッチ修復蛋白質1(MRP1)はその産物のC末側アミノ酸配列に大腸菌ミスマッチDNA修復遺伝子(MutS)の産物と相同性があり、DHFR遺伝子と88塩基対の間隔をおいて向い合って存在し、GC塩基に富んだ両方向性プロモーターにより発現が調節されている。本研究ではMRP1遺伝子の構造と機能を解析し、これまで殆ど手が付けられなかったヒトを中心とした真核細胞のDNAミスマッチ修復機構の分子レベルでの解析を目的とする。メソトレキセート耐性HL-60細胞DNAよりゲノムライブラリーを作成しMRP1遺伝子のcDNAを用いてスクリーニングしたところ数個のクローンが得られた。現在その構造解析を行なっている。MRP1/DHFR遺伝子の両方向性プロモーターの解析をすすめ各々の遺伝子に共通或は特異的な転写因子を同定した。MRP1蛋白質の全域をbaculovirus発現系により大量に発現することに成功した。MRP1蛋白質C末側27%とマルトース結合蛋白質の融合蛋白質を大腸菌で発現させると可溶性蛋白質として大量に発現された。HeLa細胞の核抽出液とミスマッチを有するoligonucleotideをインキュベートするとミスマッチに依存したretarded bandが見られた。このretarded bandは核抽出液をあらかじめMRP1蛋白質に対する抗体とインキュベートすると中和された。このことは、MRP1蛋白質がミスマッチ部位の認識に関与していることを示唆する。最近ヒト染色体2番にあるMutSホモローグの変異が癌患者より得られたDNAの中に見つかり、発がんにおけるMutSホモローグの関与が強く示唆された。染色体5番にあるMRP1遺伝子も発がんに関与している可能性があり、癌患者より得られたDNAについてもMRP1遺伝子の解析を行ないたい。

DNA repair protein 1(MRP1) is the product of DNA repair protein (MutS) in E. coli, and the product identity of MutS in E. coli is the result of DNA repair protein 1 (MRP1). DHFR gene is the product of DNA repair protein (MutS). The purpose of this study is to analyze the structure and function of MRP1 gene, and to analyze the molecular structure of eukaryotic DNA repair mechanism. The DNA of MRP1 gene was prepared by cDNA sequencing of HL-60 cells. Now the structural analysis is carried out. MRP1/DHFR gene analysis of the directivity of the gene, the gene is common or unique to the same writing factor MRP1 protein domain baculovirus discovery system was successful in large quantities. MRP1 protein C terminal 27%, soluble protein fusion protein, E. coli, soluble protein HeLa cell nuclear extract has oligonucleotide dependent This retarded band of protein was neutralized. This suggests that the MRP1 protein is important for understanding the location of the mouse. The most recent chromosome 2 mutation was found in cancer patients, and the most recent mutation was found in DNA. Chromosome 5 is the most likely candidate for MRP1 gene expression, and cancer patients are the most likely candidates for MRP1 gene expression.