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神経系の胚誘導及びその頭尾軸部域化の細胞・分子レベルにおける調節機構

神经系统胚胎诱导及其头尾区域化的细胞分子水平调控机制

基本信息

批准号：
05277202
负责人：
岡本治正
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らはこれ迄に、嚢胚期の背側中胚葉の作用により外胚葉から神経系が分化する、いわゆる神経誘導過程をツメガエル初期嚢胚細胞の初代ミクロ培養系において解析してきた。その結果、塩基性FGF(bFGF)が未分化外胚葉細胞に対し生理的濃度で背側中胚葉の神経誘導作用を代行し、神経管系統の中枢神経系ニューロンと神経冠系統の色素細胞の両者を誘導分化させる事が明らかになった。今年度はbFGFが内在性の神経誘導因子である事を確証する目的で、1.bFGFの神経誘導作用が遺伝子の転写レベルで起こる事を確証し、2.背側中胚葉の神経系頭尾軸形成作用を代行し得るかどうかを検証する為に、以下の実験を行い新たな知見を得た。1.様々な濃度のbFGF存在下で培養した外胚葉細胞からRNAを抽出し、神経分化マーカーのNCAMと表皮分化マーカーの表皮型ケラチンの発現を定量的RT-PCR法により定量解析した。その結果、NCAMの発現はbFGFの濃度に依存して誘導され、逆にケラチンの発現は抑制される事がわかり、bFGFの神経分化誘導効果と表皮分化抑制効果が転写レベルで起こる事が明らかになった。またこの時背側中胚葉マーカーのgoosecoidの転写発現は誘導されなかった事から、bFGFが外胚葉細胞に直接作用して神経分化を誘導する事が明らかになった。2.上記1の各RNA試料について、ツメガエル発生初期に後脳、脊髄で各々局所的に発現するhomeobox遺伝子En-2、XlHbox-6の転写発現量を定量解析した。その結果、bFGFは2種の部域マーカーの発現を濃度により差次的に誘導する事が明らかになった。この結果はbFGFが生体内で濃度勾配を形成し、中枢神経系の部域化を誘導する事を示唆する。今後はこの点を確証する為に前脳など部域マーカーの種類を増やし更に詳細な解析を行うと共に、生体内でFGF受容体のdominant negative突然変異の導入によりbFGFの作用を阻害したとき神経系の形成にどの様な影響が生じるかを解析していくつもりである。

The application is due to the effect of mesoderm in the embryo stage, the differentiation of the ectoderm, the differentiation of the ectoderm, the differentiation of the embryonic cell in the early stage, the primary culture in the early stage and the analysis of the culture system in the early stage. The results showed that the physiology of basic FGF (bFGF) undifferentiated ectodermal cells was different from that of normal ectodermal cells, and that of the central nervous system, the central nervous system, the coronal system, the pigment cell, the coronal system, the central nervous system, and the central nervous system. This year's "bFGF" internal God guidance factor is responsible for making sure that the purpose is correct, and the role of 1.bFGF God is to make sure that things are correct. 2. On behalf of the formation of the tail of the mesoderm, the mesoderm, the spirit of the mesoderm, the formation of the tail, the formation of the tail. 1. In the presence of bFGF, culture, ectoderm, RNA, RNA, differentiation, NCAM, epidermis, RT-PCR and quantitative analysis. The results showed that NCAM showed that the concentration of bFGF was significantly higher than that of the control group (P < 0.01), the reverse effect (P < 0.01), the inhibition of epididymal differentiation (P < 0.01) and the effect of epidermal differentiation (P < 0.05). When you are in trouble, remember that the mesoderm, the goosecoid, the bFGF, the ectoderm, the mesoderm, the ectodermal two。 In the first part of this article, the RNA data were collected, the data were collected in the early days of life, and the En-2 and XlHbox-6 were recorded in each local office in the early days of life. The results of the test results and the results of the two local domains of the bFGF system show that you are aware of the situation. The results showed that the formation of bFGF in vivo and the localization of central nervous system (CNS) in vivo showed that the events were instigated. In the future, please make sure that in the future, you need to make sure that there is a significant difference in the analysis of the general situation, the health of the FGF receptor dominant negative is suddenly affected by the harmful effect of the bFGF, and the effect of the system is affected.