広域な抗ウイルス作用をもつ硫酸化アルキルオリゴ糖の活性評価とその作用機序の解明

具有广谱抗病毒作用的硫酸化烷基寡糖的活性评价及其作用机制的阐明

• 批准号: 09240227
• 负责人: 中島 秀喜
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09240227/
• 关键词: 硫酸化アルキルオリゴ糖; 抗HIV作用; MAGIアッセイ; CCR-5; CXCR-4; ウイルス吸着阻害

硫酸化アルキルオリゴ糖や植物抽出液にみられる多糖体の抗HIV作用機序の解明を試みるために下記に示す実験系を作成した。HIVの感染は、ウイルスエンベロープ糖タンパク質のgp120と標的細胞膜上のCD4分子とが結合することでコンフォメーションの変化が起こり、gp120-CD4複合体がCXCR-4やCCR-5などのケモカインレセプターと結合し、gp41の疎水性部分が露出して細胞膜と融合する。すなわちケモカインレセプターがHIV感染におけるコレセプターとして作用し、ウイルスエンベロープと細胞膜との融合、ウイルスの侵入へと進んでいくことが最近明確にされた。我々はHIV感染におけるコレセプターであるCCR-5、CXCR-4に対する薬剤の影響を検討するために、MAGI(multinuclear activation of galactosidase indicator)-CCR-5細胞を用いたアッセイ系を確立した。すなわち、HIV-1のLTRの下流にβ-galactosidaseを結合したプラスミドを導入したCD4+HeLa細胞に、さらにヒトCCR-5遺伝子を導入した細胞を作成した。この細胞は、もともとCXCR-4をもっているため、T細胞指向性HIVにもマクロファージ指向性HIVにも両方とも感染可能となっている。この細胞にHIVを感染させると、プロウイスルDNAから転写、発現したTatタンパク質が、導入されているLTR/β-galに作用して、galactosidaseの発現を促す。感染後の細胞のgalactosidase発現の有無を検討することで、HIV感染の可否を知ることが出来る。この感染系に試験物質を加え、使用するウイルス株をマクロファージ指向性のものか、T細胞指向性のものか区別することでCCR-5またはCXCR-4とウイルスとの結合におよぼす影響を知ることが出来る。さらにCCR-5またはCXCR-4遺伝子を導入してこれを過剰発現させた細胞を作成し、ウイルス粒子の吸着を直接知る実験系でも、試験物質のウイルス吸着に対する直接的な阻止効果を検討する。今まで試験してきた結果、硫酸化アルキルオリゴ糖のDL-110は、ヒト末梢血マクロフェージを感染標的細胞とした実験系ではT細胞指向性HIVに対するのと同様に、マクロファージ指向性HIVにも抗ウイルス活性がみられた。今後は、MAGI-CCR-5細胞を用いた感染系やCXCR-4、CCR-5を過剰発現した細胞を用いて、アルキルオリゴ糖の作用機序をさらに詳細に解明していく。また、HIVを可溶性CD4で前処理しておいてMAGI-CCR-5に感染させた場合のアルキルアリゴ糖の抗ウイルス活性を検討することで、HIVgp120-CD4複合体とCCR-5との結合に及ぼすアルキルアリゴ糖やその他のウイルス吸着・侵入に影響を及ぼす薬剤の作用機序を検討していく予定である。

Sulfating ア ル キ ル オ リ ゴ や sugar plant extract に み ら れ る polysaccharide body の anti-hiv function machine sequence の interpret を try み る た め に under に shown す remember be を 験 department made し た. は の HIV infection, ウ イ ル ス エ ン ベ ロ ー プ sugar タ ン パ ク qualitative の gp120 と の CD4 molecules on the target cell membrane と が combining す る こ と で コ ン フ ォ メ ー シ ョ ン の variations change since が こ り, gp120 - CD4 complex が CXCR 4 や CCR - 5 な ど の ケ モ カ イ ン レ セ プ タ ー と し, gp41 の 疎 water Part が exposed the cell membrane て fused する. す な わ ち ケ モ カ イ ン レ セ プ タ ー が HIV infection に お け る コ レ セ プ タ ー と し て し, ウ イ ル ス エ ン ベ ロ ー プ と membrane と の fusion, ウ イ ル ス の intrusion へ と into ん で い く こ と が recently clear に さ れ た. I have 々 々 HIV infection におけるコレセプタ である である であるCCR-5, CXCR-4に effects on する drug crusts を検 to するために MAGI(multinuclear activation of galactosidase) indicator)-CCR-5 cells を are established by を たアッセ たアッセ line を. の す な わ ち, HIV - 1 LTR の obscene に beta - galactosidase を combining し た プ ラ ス ミ ド を import し た CD4 + HeLa に, さ ら に ヒ ト CCR - 5 heritage 伝 son を import し を た cells into し た. こ の cell は, も と も と CXCR 4 を も っ て い る た め directivity, T cells HIV に も マ ク ロ フ ァ ー ジ directivity HIV に も struck party と も infection may と な っ て い る. こ の を HIV cells に さ せ る と, プ ロ ウ イ ス ル DNA か ら planning write, 発 now し た Tat タ ン パ ク が, import さ れ て い る LTR/beta gal に role し て, galactosidase の 発 を promote す now. の cells after infection の galactosidase 発 の presence of を now beg す 検 る こ と で, HIV infection can の を る こ と が る. こ の infection department に test material を え, use す る ウ イ ル ス strains を マ ク ロ フ ァ ー ジ directivity の も の か directivity, T cells の も の か difference す る こ と で CCR - 5 ま た は CXCR 4 と ウ イ ル ス と の combining に お よ ぼ す influence を know る こ と が る. さ ら に CCR - 5 ま た は CXCR 4 legacy 伝 son を import し て こ れ を before turning 発 now さ せ を た cells make し, ウ イ ル ス particle の sorption を directly know る be 験 department で も, test material の ウ イ ル ス sorption に す seaborne る directly な stop working fruit を beg す 検 る. Today ま で test し て き た results, sulfating ア ル キ ル オ リ ゴ の DL - 110 は sugar, ヒ マ ト peripheral blood ク ロ フ ェ ー ジ を infected target cell と し た be 験 department で は t-cell directivity HIV に す seaborne る の と with others に, マ ク ロ フ ァ ー ジ directivity HIV に も resistance ウ イ ル ス active が み ら れ た. Future は, tells the CCR - 5 cells を using い た infection department や CXCR - 4, 5 を CCR - turning 発 now し た cells を using い て, ア ル キ ル オ リ ゴ sugar の role machine sequence を さ ら に detailed に interpret し て い く. ま た, HIV before を soluble CD4 で 処 し て お い て tells the CCR - 5 に infection さ せ た occasions の ア ル キ ル ア リ ゴ sugar の resistance ウ イ ル ス active を beg す 検 る こ と で, HIVgp120 - CD4 complex と CCR - 5 と の に and ぼ す ア ル キ ル ア リ ゴ sugar や そ の he の ウ イ ル ス sorption intrusion に influence The sequence of action of を and ぼす drugs is を検 to determine the である, て, く and く.

项目成果

Gao,Y., Fukuda,A., Nakashima,H.et al.: "Synthesis of regioselective substituted curdlan sulfates with medium molecular weights and their specific anti-HIV-1 activities." Macromolecules. 30. 3224-3228 (1997)

高，Y.，福田，A.，中岛，H.等人：“中等分子量的区域选择性取代凝胶多糖硫酸盐的合成及其特异性抗 HIV-1 活性。”

Nakano,M., Itoh,Y., Mizuno,T.and Nakashima,H.: "Polysaccharide from Aspalatus linearis with strong anti-HIV activity." Biosci.Biotech.Biochem.61. 267-271 (1997)

Nakano,M.、Itoh,Y.、Mizuno,T. 和 Nakashima,H.：“来自 Aspalatus Linearis 的多糖具有很强的抗 HIV 活性。”

Soung-Choi,Y., Won-Kang,B., Nakashima.H., et al.: "Synthesis of sulfated deoxyribofuranans having selective anti-AIDS virus activity by ring-opening copolymerization of 1,4-anhydro ribose derivatives." Polymer Journal. 29. 374-379 (1997)

Soung-Choi,Y.、Won-Kang,B.、Nakashima.H.等人：“通过 1,4-脱水核糖衍生物的开环共聚合成具有选择性抗艾滋病病毒活性的硫酸化脱氧核呋喃。”

Uryu,T., Katsuraya,K., and Nakashima,H.: "Synthesis of sulfated alkyl origosaccharides with potent anti-HIV-1 activity." Macromol.Symp.120. 147-158 (1997)

Uryu,T.、Katsuya,K. 和 Nakashima,H.：“具有有效抗 HIV-1 活性的硫酸化烷基低聚糖的合成。”

Premanathan,M., Nakashima,H., Igarashi,R., et al.: "Lecithinized superoxide dismutase:an inhibitor of human immunodeficiency virus replication." AIDS Res.Human Retroviruses. 13. 283-290 (1997)

Premanathan,M.、Nakashima,H.、Igarashi,R. 等人：“卵磷脂化超氧化物歧化酶：人类免疫缺陷病毒复制的抑制剂。”