接着斑分子の動態とチロシン燐酸化のリアルタイムイメージング

粘着斑分子动力学和酪氨酸磷酸化的实时成像

• 批准号: 09273223
• 负责人: 曽我部 正博
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09273223/
• 关键词: 血管内皮細胞; 伸展刺激; 形態応答; 接着斑分子; リアルタイムイメージング; 近接場顕微鏡

血管内皮細胞は一般的に紡錘形を呈し、血管走行に対してその長軸を平行に配列している。この形態や配列は血流に対する機械的抵抗を減弱し、内皮細胞の血管壁からの剥離を防ぐという大切な意義がある。これまでに血流や血管伸展等の機械刺激がこの形態や配列を導くこと、細胞骨格や接着斑分子、あるいは接着斑蛋白質のチロシン燐酸化が形態決定に重要であることが示唆されている。本研究の目的は、シリコン膜上に培養したヒト血管内皮細胞(HUVECs)を用いて、1軸周期伸展刺激(血管拡張刺激に相当)による形態配列応答の分子機構を、分子生物学とイメージング技術を駆使して明らかにするとともに、信号伝達分子のリアルタイムイメージング法を開発することにある。今年度は特にチロシンキナーゼsrcとその標的蛋白質である接着斑キナーゼ(FAK)に注目して解析し、以下の結果を得た。(1)アンチセンス等の分子生物学的手法により、形態反応には、srcの活性化とFAKのチロシン燐酸化が必須であることを発見した。(2)免疫抗体染色法により、この両者の空間分布が形態や細胞骨格と強い相関を持って変化することが分かった。(3)両分子の遺伝子のクローニングとシーケンスをほぼ完了し、リアルタイムイメージングに向けてGFP付加遺伝子を構成中である。(4)これらの分子の動態を見るためにの反射干渉顕微鏡と全反射型近接場顕微鏡のシステムをほぼ完成し、GFP付加シナプトタグミンをリアルタイムイメージングすることができた。

The general shape of vascular endothelial cells is similar to that of vascular endothelial cells, and the blood vessels are parallel and parallel. The resistance of the blood flow machine is weak, the vascular wall of the endothelial cell is dissected, the blood vessel wall is peeled off, and the blood vessel wall is separated. In the form of mechanical stimulation, such as blood flow, vasodilation, and so on, the equipment should be equipped with a series of equipment, such as blood flow, vasodilation, etc., the shape of blood flow, blood vessel stretching and other mechanical stimulation equipment should be arranged in the configuration of blood flow, blood vessel stretching, and so on. In this study, vascular endothelial cells (HUVECs) were cultured on the membrane in vitro, and 1 cycle stretching stimulation (equivalent to vascular stimulation) was used. Molecular mechanisms and molecular biological techniques were used to make clear the molecular mechanisms and signals of vascular endothelial cells (EEC). This year, we have paid special attention to the results of src protein analysis. The results show that the following results are good. The main results are as follows: (1) Molecular biology techniques, such as molecular biology techniques, morphology response, src activation, FAK activation, acidification, and so on, must be effective. (2) Immunoantibody staining method was used to analyze the distribution of cells and bones in the space of patients and children. (3) if you are done, you will have to pay your GFP for more money. (4) the dynamics of the molecule, the reflection dryness, the total reflection proximity, the total reflection proximity, the micro reflection, the total reflection, the total reflection

项目成果

Sokabe,M., Nunogakui,K. & Naruse,K.: "Stretch activated ion channels:Single channel vs.whole cell responses" Progr Cell Res.6. 139-149 (1997)

索卡部，M.，布学院，K.

Sokabe,M., Auerbach,A., Sigworth,F. (Eds): ""Towards Molecular Biophysics of Ion Channels"" Elsevier Sci BV,Amsterdam,Netherland, 307 (1997)

索卡贝，M.，奥尔巴赫，A.，西格沃斯，F.

Qi Z., Sokabe,M.: "Dynamic properties of individual water molecules in a hydrophobic pore lined with acyl chains : a molecular dynamics study." Biophys Chem. (in press).

Qi Z.，Sokabe，M.：“内衬酰基链的疏水孔中单个水分子的动态特性：分子动力学研究。”

Naruse,K., Yamada,T. Sokabe,M.: "Involvement of SA channels in orienting response of cltured endothelial cells to cyclic stretch." Am,J.Physiol.(in press).

成濑，K.，山田，T.

Yu,W., Sokabe,M.: "Hypotonically induced whole cell currents in A6 cells:relationship with cell volume and cytoplasmic Ca^<2+>." Jpn J Physiol. 47(6). (1997)

Yu,W., Sokabe,M.：“A6 细胞中低渗诱导的全细胞电流：与细胞体积和细胞质 Ca^2 > 的关系。”