骨形成機構の細胞生物学的・分子生物学的解析

骨形成机制的细胞和分子生物学分析

• 批准号: 09275227
• 负责人: 山口 朗
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09275227/
• 关键词: 骨形成; 骨芽細胞; ヘッジホッグ; 培養細胞

近年、種々の組織・器官の形成過程でHedgehog(Hh)が重要な役割を担っていることが報告されている。Sonic hedgehog(Shh)のノックアウトマウスは神経系の異常の他に、脊椎骨の欠損、肋骨の部分欠損、四肢の自脚の欠損などの骨格異常を呈するために、Shhの骨格形成への関与が注目されている。今年度は、骨芽細胞の分化に及ぼすShhの役割の解析を目的として研究を行った。多分化能を有するマウス胎児由来のC3H10T1/2細胞とマウス胎児頭蓋冠由来の骨芽細胞様細胞MC3T3-E1細胞を用いて実験を行った。ニワトリ胚線維芽細胞にRCASベクターを用いてSHHのN末端側を発現させ、その培養状清(SHH-s up)をSHH蛋白として用いた。SHH-s upをC3H10T1/2およびMC3T3-E1細胞に添加すると、骨芽細胞の初期分化マーカーであるALP活性が誘導された。さらに、MC3T3-E1細胞ではオステオカルシンのmRNAの発現も誘導された。次にSHH-supによる骨芽細胞の分化の誘導がBMPを介した作用かを検討した。C3H10T1/2およびMC3T3-E1細胞のBMP-2,-4,-7のmRNAの発現は、SHH-supで処理しても明らかな上昇は認められなかった。しかし、SHH-supと同時に可溶性BMP受容体IAを添加するとSHH-supで誘導されたALP活性は有意に抑制された。これらの結果は、SHHによる骨芽細胞の分化促進作用には何らかの機序でBMPが関与していることを示唆している。また、Shhを過剰発現したニワトリ胚線維芽細胞をヌードマウスの筋肉内に移植した。その結果、移植した部では3週間後に明らかな骨形成が誘導された。以上の結果より、SHHは骨芽細胞の分化および骨形成の過程で重要な役割を担う因子であると考えられた。

In recent years, a variety of tissue organs have been formed. Hedgehog (Hh) is an important part of the system. Sonic hedgehog (Shh) often shows signs of malaise, vertebrae, ribs, limbs, bones, bones, and Shh bones. Objective to analyze the cellular differentiation of bone buds and bone buds in this year's Shh. Multiple differentiation can lead to the origin of C3H10T1/2 cells, MC3T3-E1 cells, bone buds, bone buds, bone bu The germ line was maintained by RCAS. The N-terminal of SHH was detected by SHH-s up, and the SHH protein was detected by Elisa. SHH-s up, C3H10T1/2, MC3T3-E1, and bone bud were added in the early stage of differentiation. The activity of ALP was detected by Elisa. The MC3T3-E1 cell does not need to know if you are going to have a problem. You need to know that you are in a situation where you need to know how to direct the mRNA. Secondary SHH-sup, bone bud, cellular differentiation, BMP, mediate, mediate, induce, differentiate, induce, mediate, and induce bone bud differentiation. C3H10T1/2

项目成果

Wada Y, Kataoka H, Yamaguchi A.et al.: "Changes in osteoblast phenotype during differentiation of enzymatically isolated rat calvaria cells." BONE. (in press). (1998)

Wada Y、Kataoka H、Yamaguchi A.等人：“酶法分离的大鼠颅盖细胞分化过程中成骨细胞表型的变化。”

Nakamura T, Aikawa T, Yamaguchi A,et al.: "Hedgehogs synergiatically promote osteoblast differentiation with BMP-2." Biochem.Biophys.Res.Commun.237. 465-469 (1997)

Nakamura T、Aikawa T、Yamaguchi A 等人：“刺猬与 BMP-2 协同促进成骨细胞分化。”

Kawasaki K, Gao Y, Yamaguchi A,et al.: "Osteoclasts are present in gp 130-deficient mice." Endocrinology. 138. 4959-4965 (1997)

Kawasaki K、Gao Y、Yamaguchi A 等人：“gp 130 缺陷小鼠中存在破骨细胞。”

Ishizuya T, Yokose S, Yamaguchi A,et al: "Parathyroid hormone exerts disparate effects on osteoblast differentiation depending on exposure time in rat osteobllastic cells." J.Clin.Invest.99. 2961-2970 (1997)

Ishizuya T、Yokose S、Yamaguchi A 等人：“甲状旁腺激素对成骨细胞分化产生不同的影响，具体取决于大鼠成骨细胞的暴露时间。”

Nishida S, Nakamura T, Yamaguchi A,et al.: "The effect of monoclonal anti-human GP130 antibody on the bone metabolism in normal and ovariectomized rats." Calcif Tissue Int. (in press). (1998)

Nishida S、Nakamura T、Yamaguchi A 等人：“单克隆抗人 GP130 抗体对正常和卵巢切除大鼠骨代谢的影响”。